鵝細(xì)小病毒VP2基因的克隆、序列分析及原核表達(dá).pdf

1、該研究參考GenBank發(fā)表的GPV-B株全基因序列,借助Oligo4.1設(shè)計(jì)一對(duì)引物,采用PCR方法對(duì)國(guó)內(nèi)GPV分離株H1株的VP2基因進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物與pMD18-T載體連接后測(cè)序,結(jié)果表明：H1株VP2基因核苷酸序列全長(zhǎng)1764bp,編碼587個(gè)氨基酸,與已發(fā)表B株的VP2基因相比,核苷酸序列有25個(gè)堿基差異,推導(dǎo)氨基酸序列有10個(gè)氨基酸差異,其中9個(gè)氨基酸的變異由相應(yīng)密碼子的第一位堿基引起,25個(gè)不同堿基中的其它15個(gè)變異堿基

2、均不引起氨基酸的改變.利用DNA重組技術(shù),將其結(jié)構(gòu)蛋白VP2基因亞克隆至原核表達(dá)載體pP<,ROEX>-HTb,IPTG誘導(dǎo)后成功表達(dá)出與預(yù)期大小相符的約72ku的融合蛋白,光密度掃描對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行初步定量,表明表達(dá)產(chǎn)物約占菌體總蛋白的14﹪.表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA金屬鏊合層析柱純化后,得到了純度較高的6His-VP2融合蛋白.采用Western-blot方法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行反應(yīng)原性分析,結(jié)果表明所得6His-VP2融合蛋白具有較好的反應(yīng)