豬乙型腦炎—豬圓環(huán)病毒病二聯(lián)滅活疫苗研究.pdf

1、豬乙型腦炎和豬圓環(huán)病毒病是危害養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染性疾病，而且乙型腦炎還嚴(yán)重危害人類身體健康。目前還沒有特效藥治療這兩種疾病，疫苗預(yù)防是控制這兩種疾病的有效手段。為了有效預(yù)防這兩種疾病，本研究對本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的乙型腦炎病毒LS株在Vero細(xì)胞上的培養(yǎng)特性和免疫原性等進(jìn)行了研究，并利用乙型腦炎病毒LS株和本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的豬圓環(huán)病毒2型HNYY株研制了豬乙型腦炎-豬圓環(huán)病毒病二聯(lián)油乳劑滅活苗。具體研究結(jié)果如下:
　　1.乙型腦炎病毒L

2、S株的理化特性及其在Vero細(xì)胞上的增殖動態(tài)研究
　　對乙型腦炎LS株的理化特性及其在Vero細(xì)胞上的增殖規(guī)律進(jìn)行研究。將乙型腦炎病毒LS株以106.2TCID50的接種量接種在100mL細(xì)胞瓶鋪滿單層的Vero細(xì)胞，在病毒接種后每隔8h收集細(xì)胞上清液和混懸液并測定病毒效價。結(jié)果顯示，病毒理化特性研究發(fā)現(xiàn)乙型腦炎病毒LS株對乙醚、胰蛋白酶、熱(56℃)、酸(pH5)敏感，反復(fù)凍融，對病毒活力影響輕微;在接種后56h細(xì)胞上清液和混懸

3、液的病毒效價達(dá)到高峰，分別為106.0TCID50/0.1 mL、106.5TCID50/0.1 mL。
　　2.乙型腦炎病毒羅山株的免疫原性研究
　　將乙型腦炎病毒LS株接種Vero細(xì)胞增殖，收獲的病毒液經(jīng)甲醛滅活后，以礦物油為佐劑制備出油乳劑滅活苗。將疫苗免疫小鼠和豬，分別免疫2次，間隔2周，免疫后采集血清，檢測血清中抗乙型腦炎病毒抗體水平。結(jié)果顯示:試制疫苗免疫小鼠能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生平均1∶64的乙型腦炎乳膠凝集試驗(yàn)(LAT

4、)抗體，免疫豬能夠誘導(dǎo)豬產(chǎn)生平均1∶200的乙型腦炎血凝抑制(HI)抗體，抗體水平比市售豬乙型腦炎滅活疫苗高。證明了乙型腦炎病毒LS株具有良好的免疫原性。
　　3.豬乙型腦炎-豬圓環(huán)病毒病二聯(lián)滅活疫苗的研究
　　利用本實(shí)驗(yàn)分離鑒定的乙型腦炎病毒LS株和豬圓環(huán)病毒2型HNYY株分別在Vero細(xì)胞和PK-15細(xì)胞上增殖出較高效價的病毒液，然后通過濃縮，甲醛滅活，等量混合，加入油佐劑乳化，制備出豬乙型腦炎-豬圓環(huán)病毒病二聯(lián)油乳劑滅