豬圓環(huán)病毒2型油乳劑滅活疫苗及其免疫效力研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)是造成斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的主要病原，目前已呈全球分布。疫苗免疫是預防PCV-2感染的主要措施之一。
　　 為預防與控制本地區(qū)PCV-2感染，本研究經間接免疫熒光、抗原性試驗，從PCV-2安徽分離株中篩選出一株疫苗候選毒株。疫苗株經適應細胞PK-15大量增殖，進行滴度測定、甲醛滅活、超濾濃縮后，制備成油佐劑滅活疫苗。研究對滅活疫苗的免疫劑量、免疫程序進行了優(yōu)化，并通過攻毒保護試驗對疫苗的免疫效力進

2、行評價。
　　 1、從4株PCV-2安徽分離毒株中篩選出一株病毒PCV2-BH0801株作為疫苗候選毒株，病毒滴度為10-4.59 TCID50/0.1mL。通過對PCV-2抗體陰性的斷奶仔豬進行接種試驗表明該毒株具有良好的抗原性。
　　 2、將PCV-2-BH0801株接種PK-15細胞進行大量擴增，獲得病毒滴度為10-4.55TCID50/0.1mL的病毒細胞培養(yǎng)物。0.1％甲醛37℃條件下30小時完全滅活后，利用中

3、空纖維超濾膜組件對病毒細胞培養(yǎng)物進行超濾濃縮，使病毒滴度達到＞10-5.0TCID50/0.1mL。經油佐劑高速乳化制備成油包水型滅活疫苗，物理性狀、無菌檢驗和安全性檢驗均合格。
　　 3、應用1mL、2mL和4mL等不同免疫劑量的滅活疫苗免疫21日齡斷奶仔豬，免疫后對仔豬生長性能、PCV-2抗體水平進行檢測。應用PCV2滅活疫苗2mL免疫劑量分別免疫14、21、28日齡仔豬，間隔14天和21天進行加強免疫4mL，免疫后對仔豬的

4、生長性能情況及PCV-2抗體水平進行檢測以優(yōu)化免疫程序。結果顯示，仔豬28日齡首免2mL PCV-2滅活疫苗其抗體水平上升速度快，仔豬免疫應激小，對生長性能影響小，間隔21天加強免疫4mL PCV-2滅活疫苗后抗體水平能長時間維持較高水平。
　　 4、通過免疫豬群的生長性能監(jiān)測、抗體水平變化監(jiān)測、病毒血癥檢測、病理變化觀察及組織中PCV-2的檢測，對PCV-2滅活疫苗的免疫效力進行了評價。結果表明，免疫組攻毒后其生長性能未受影響

5、，抗體水平始終顯著高于對照組，且均未出現病毒血癥，各組織臟器均未見有明顯的病理變化，也未能夠檢測到PCV-2；而對照組平均日增重則顯著低于免疫組，攻毒后7天即能檢測到病毒血癥，至21天依然能夠檢測到病毒血癥，仔豬肺臟、淋巴結、脾臟以及腎臟均有不同程度的病變，且在肺臟和淋巴結組織中檢測到PCV2。說明本研究制備的PCV2滅活疫苗對仔豬有良好的保護作用。
　　 5、研究還對攻毒保護試驗仔豬血清中Th1細胞分泌的IL-2、IFN-y以

6、及Th2細胞分泌的IL-4、IL-10等細胞因子進行了檢測。結果表明，免疫組感染PCV2后Th2細胞分泌的細胞因子含量明顯高于Th1細胞分泌的細胞因子，但感染后期Th1細胞因子有上升的趨勢，說明免疫組仔豬感染后在體液免疫反應保護下機體各項免疫反應趨于正常；感染后期對照組仔豬各細胞因子含量均低于免疫仔豬。結果表明，本研究制備的PCV-2滅活疫苗能夠保護機體的免疫機制不會受到PCV2感染所致的免疫抑制。
　　 綜上所述，本研究制備的