幾種園藝植物病毒檢測技術(shù)研究.pdf

1、園藝植物是一類供人類食用或觀賞的植物。園藝植物病毒是嚴重影響園藝生產(chǎn)的重要因素之一。為了進一步控制病毒危害，本研究旨在建立從園藝植物辣椒、蘋果、櫻桃中分離dsRNA或總RNA的方法，并應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳、RT-PCR技術(shù)、免疫捕獲PCR技術(shù)等方法對分離的核酸進行鑒定，從而建立可有效檢測病毒的技術(shù)體系。此外，還分別針對不同試材（如葉片、辣椒制品、種子）中的病毒進行了檢測，并對辣椒病毒的滅活進行了初步探索。
　　1、對辣椒病毒dsRN

2、A的提取進行優(yōu)化，建立了成熟的提取辣椒病毒dsRNA的技術(shù)體系，通過瓊脂糖凝膠電泳獲得了特異的dsRNA片段。分別采用雙酶解方法和DNA凝膠回收試劑盒對dsRNA譜帶進行純化，經(jīng)比較采用DNA凝膠回收試劑盒回收dsRNA譜帶比雙酶解法更好，可有效獲得單一的dsRNA片段。
　　2、利用改進的CTAB法提取辣椒制品中的總RNA，并建立RT-PCR技術(shù)檢測辣椒輕斑駁病毒的技術(shù)體系。對辣椒制品（辣椒醬、咸菜、辣椒粉）中的辣椒輕斑駁病毒進

3、行檢測，在一些辣椒制品中檢測到了辣椒輕斑駁病毒，說明辣椒輕斑駁病毒較難以被破壞。將辣椒制品中的辣椒輕斑駁病毒經(jīng)摩擦接種轉(zhuǎn)移至煙草，可在煙草上顯示明顯病毒侵染癥狀，并進一步經(jīng)RT-PCR證實。從而說明辣椒制品中含有的辣椒輕斑駁病毒可有效傳播及增殖。已有報道顯示辣椒輕斑駁病毒可能侵染人體并引起一系列的反應(yīng)，因而食品中的辣椒輕斑駁病毒也需要被密切關(guān)注。
　　3、利用RT-PCR技術(shù)，對北京、沈陽、哈爾濱三地的商品辣椒種子中的辣椒輕斑駁病

4、毒的帶毒率進行了分析，結(jié)果顯示40種種子中，共有15種種子被辣椒輕斑駁病毒感染，說明當前該病毒的危害及傳播已較嚴重。
　　4、利用高溫干熱處理對辣椒種子內(nèi)的辣椒輕斑駁病毒進行了滅活處理，結(jié)果顯示，70℃處理未見明顯滅活效果，75℃處理48h可滅活70％的病毒，且對種子的發(fā)芽率影響相對較小。該技術(shù)體系具有一定的應(yīng)用潛力。
　　5、利用RT-PCR技術(shù)對蘋果病毒進行了檢測，建立了對3種蘋果病毒的檢測技術(shù)體系。對一些蘋果、毛櫻桃、