豬細(xì)小病毒抗原快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、豬細(xì)小病毒(Porcineparvovirus,PPV)是一種DNA病毒,隸屬于細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬,是豬場(chǎng)比較常見(jiàn)疾病,以引起豬的繁殖障礙為特征。該病可以豬群中長(zhǎng)期隱性感染,并且感染率可以高達(dá)90％以上,對(duì)豬群造成嚴(yán)重危害。臨床上常用的血清學(xué)診斷方法因受豬細(xì)小病毒病長(zhǎng)期帶毒和低劑量持續(xù)感染的限制,而使得檢測(cè)難度加大。同時(shí)實(shí)驗(yàn)室診斷方法也受到設(shè)備、環(huán)境和時(shí)間的制約,無(wú)法得以推廣。本論文就針對(duì)以上弊端進(jìn)行研制特異強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便的膠體金試紙快

2、速檢測(cè)試紙。
　　 在試驗(yàn)進(jìn)行中由于商品化抗豬IgG和兔IgG酶標(biāo)抗體,均出現(xiàn)效價(jià)低,組化效果差。于是通過(guò)提取及凝膠柱純化豬IgG和兔IgG免疫山羊,經(jīng)過(guò)4次以上免疫,而后頸靜脈采血而得到AGP效價(jià)1:160-320的二抗血清。提取血清IgG利用SATP—SMCC法標(biāo)記HPR,得到ELISA效價(jià)1:64000的酶標(biāo)二抗用于實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。
　　 通過(guò)PK-15傳代細(xì)胞系在DMEM培養(yǎng)基中對(duì)豬細(xì)小病毒AV30-7909毒株的擴(kuò)繁

3、,經(jīng)過(guò)5次傳代、擴(kuò)繁增殖,出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變。收集病毒通過(guò)濃縮、超速離心純化,免疫實(shí)驗(yàn)兔,得到效價(jià)1:51200的多抗血清。
　　 利用純化的PPV細(xì)胞毒免疫BALB/c小鼠,經(jīng)過(guò)三次免疫獲得理想免疫效果。應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)篩選出特異性雜交瘤細(xì)胞株(7F487)。通過(guò)體內(nèi)誘導(dǎo)制備PPVmAb,提取、純化單抗IgG,而后通過(guò)膠體金標(biāo)記研制出PPV抗原膠體金試紙,可以測(cè)定出1:640稀釋的組織毒。試紙檢測(cè)豬瘟、流行性乙型腦炎病毒和藍(lán)耳病