辣椒輕斑駁病毒快速檢測技術(shù)研究.pdf

1、本研究提純了辣椒輕斑駁病毒，并對其病毒粒子形態(tài)進行了電鏡觀察，采用SDS.聚丙烯酰胺凝膠電泳測定了其分子量，制備了用于斑點免疫結(jié)合法(DIBA)和膠體金免疫試紙條(CGIS)法檢測的高效價的特異性抗血清，進而為快速、準確檢測病毒打下了良好的基礎(chǔ)。 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(DAS-ELISA)、斑點免疫結(jié)合法、膠體金免疫試紙條法、RT-PCR和實時熒光RT-PCR等方法和技術(shù)，對PMMoV檢測技術(shù)進行了研究，并比較了各種檢測

2、方法的靈敏度及特異性。取得以下結(jié)果： (1)在檢測1粒陽性種子時，DAS-ELISA、CGIS 檢測稀釋限點為1：51200，DIBA稀釋限點為1:12800，RT-PCR檢測稀釋限點為1:100000，實時熒光RT-PCR在稀釋1:1000000時仍可檢測到；在檢測葉片時，DAS-ELISA、CGIS、DIBA檢測稀釋限點均為1：3200。 (2)應(yīng)用DIBA 對國內(nèi)市場上購買的17份辣椒種子攜帶PMMoV的檢測結(jié)果表

3、明，不同品種的辣椒種子攜帶PMMoV的帶毒率不同，17份品種只有5份品種種子帶毒率為0％，有7份品種種子帶毒率超過50％，其中有3份品種種子帶毒率超過90％。 (3)RT-PCR檢測PMMoV在辣椒種子上的帶毒部位結(jié)果表明，PMMoV主要分布在種皮、種子表面，胚乳次之，不侵染胚。 (4)通過對辣椒種子帶毒與傳毒的關(guān)系研究，帶毒與不帶毒的種子直播后均未發(fā)現(xiàn)發(fā)病植株及檢測到PMMoV，移栽后，來自陽性種子的1280株植株中只