防治哈密瓜細(xì)菌性果斑病拮抗酵母菌的篩選及其生防機(jī)理研究.pdf

1、由燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N（Acidovorax avertae subsp．citrulli，Aac）引起的哈密瓜果斑病（Bacterial fruit blotch，BFB）是瓜類生產(chǎn)中一種毀滅性細(xì)菌性病害。目前在瓜類作物中無(wú)免疫品種。雖然化學(xué)防治對(duì)該病有一定的防治效果，但是大量使用化學(xué)殺菌劑往往會(huì)造成環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留，以及引起病原菌抗藥性等問(wèn)題。生物防治被認(rèn)為是一種合理而又安全的防治手段。探討利用酵母菌防治哈密瓜細(xì)菌性果斑病是非常必要

2、的。本論文從拮抗酵母菌的篩選、防效評(píng)估、拮抗酵母菌菌株的鑒定、發(fā)酵體系、抑菌物質(zhì)的理化性質(zhì)、以及抑菌機(jī)理等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，獲得如下研究結(jié)果：
　　 1、從湖北武漢、河南信陽(yáng)和新疆石河子采集的植物和土壤等樣品中分離獲得463株酵母菌。經(jīng)過(guò)平板抗生性測(cè)定和盆栽活體試驗(yàn)，成功篩選出一株有效防治哈密瓜細(xì)菌性果斑病的拮抗酵母菌菌株0732-1。
　　 2、在溫室試驗(yàn)中，用酵母菌0732-1發(fā)酵液處理帶菌哈密瓜種子，能顯著降低A

3、ac對(duì)哈密瓜幼苗的侵染。在第一次試驗(yàn)中，使用0732-1、農(nóng)用鏈霉素和鹽酸處理帶菌種子的發(fā)病率分別為2.8％、0和2.6％，對(duì)照發(fā)病率為97.6％。在第二次試驗(yàn)中，發(fā)病率分別是7％、8.8％和3.7％，對(duì)照發(fā)病率為83.3％。兩次試驗(yàn)中防病效果三者間無(wú)顯著差異（P>0.05）。在田間試驗(yàn)中，酵母菌0732-1發(fā)酵液（1×107cfu/ml或1x109cfu/ml）能有效降低哈密瓜細(xì)菌性果斑病的危害。另外，酵母菌0732-1先于Aac接種

4、的防效優(yōu)于同時(shí)接種酵母菌和Aac的防效。在哈密瓜幼苗灌根施用中，酵母菌0732-1無(wú)顯著防病和促生的效果。
　　 3、根據(jù)形態(tài)特征、營(yíng)養(yǎng)代謝特征、生理生化特性、以及ITS-5.8S rDNA片段序列分析（GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中登錄號(hào)為HU380207），將酵母菌0732-1鑒定為Pichiaanomala。
　　 4、酵母菌0732-1能利用8種碳源（蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、果糖、檸檬酸鈉、乳糖、甘油和乙醇）和6種氮源（硫

5、酸銨、硝酸銨、尿素、磷酸二氫銨、硝酸鉀、蛋白胨）進(jìn)行生長(zhǎng)和繁殖，并能產(chǎn)生抑制Aac的抗細(xì)菌物質(zhì)（antibacterial substances，ABS）。其中6種碳源（果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乙醇和甘油）和4種氮源（硫酸銨、磷酸二氫銨、硝酸鉀和蛋白胨）適于產(chǎn)生ABS。最適碳源為果糖。磷酸二氫鉀（29.39 mmol/L）有利于酵母菌0732-1產(chǎn)生ABS。
　　 5、酵母菌0732-1抑菌譜廣，對(duì)供試17種真菌和4種細(xì)菌具

6、有抑制效果，其中6種真菌和1種細(xì)菌（Aac）是侵染瓜類植物的病原菌。因而，此酵母菌具有防治多種瓜類植物病害的潛質(zhì)。
　　 6、通過(guò)單因素試驗(yàn)對(duì)酵母菌0732-1產(chǎn)生ABS的條件進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果表明：酵母菌0732-1產(chǎn)生ABS的最適環(huán)境條件是：初始pH值為9.0；裝樣量為80ml（250ml三角瓶）；接種量為10％；溫度20℃；培養(yǎng)96 h后，發(fā)酵液中的ABS抑菌活性達(dá)到最大。
　　 7、酵母菌0732-1產(chǎn)生的AB

7、S可能是一類耐熱、耐酸、抗紫外線的非蛋白極性物質(zhì)。當(dāng)環(huán)境pH高于9.0時(shí)，抑菌活性完全喪失。采用硫酸銨分級(jí)沉淀和有機(jī)溶劑萃取不能從發(fā)酵液中分離出ABS。利用蒸餾法可以得到部分ABS。
　　 8、試驗(yàn)證實(shí)：酵母菌0732-1的防病機(jī)制包括抗生作用和誘導(dǎo)寄主抗性。酵母菌0732-1在培養(yǎng)過(guò)程中能產(chǎn)生大量的ABS，并能對(duì)Aac具有明顯抑菌作用；施用該菌及其發(fā)酵物均能提高哈密瓜幼苗體內(nèi)3種防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)酶（POD、PAL和CAT）的產(chǎn)生。