不結(jié)球白菜游離小孢子培養(yǎng)及胚胎發(fā)生相關(guān)基因的分離.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)(Isolated Microspore Culture， IMC)技術(shù)在作物遺傳育種上具有重要作用，通過這一技術(shù)可以快速獲得純合的育種材料系統(tǒng)，縮短育種年限，提高育種效率；還可以獲得雙單倍體(DH)群體用于遺傳分析、遺傳圖譜構(gòu)建和分子標(biāo)記等研究。因此，深入完善該技術(shù)并對其進(jìn)行分子機(jī)制方面研究具有重要意義。本研究旨在進(jìn)一步優(yōu)化不結(jié)球白菜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)并從中分離與游離小孢子胚胎發(fā)生相關(guān)的基因。具體研究內(nèi)容如下：
　

2、　 1、研究了基因型、低溫處理、熱激處理和高糖濃度處理對不結(jié)球白菜游離小孢子胚胎發(fā)生的影響。結(jié)果顯示：不同基因型材料小孢子胚胎發(fā)生能力明顯不同；對供體花蕾進(jìn)行1或3d的低溫預(yù)處理能顯著提高出胚率，超過5d則明顯降低，并且不同基因型對低溫預(yù)處理的反應(yīng)不同；熱激處理對小孢子胚胎發(fā)生起關(guān)鍵作用，不同基因型所要求的最佳熱激溫度和時(shí)間不同；以17％的高糖濃度培養(yǎng)基對游離小孢子進(jìn)行1～4d預(yù)處理能顯著提高出胚率，隨處理時(shí)間的延長效果降低，但在1～

3、4d范圍內(nèi)胚誘導(dǎo)率均高于對照。
　　 2、以‘上海605’、‘高華’的子葉型小孢子胚為外植體，研究冷處理、活性炭及AgNO3對小孢子植株再生的影響，并對再生植株染色體倍性進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明：對小孢子胚進(jìn)行5d的4℃冷處理培養(yǎng)能提高其胚芽誘導(dǎo)率和胚芽數(shù)；培養(yǎng)基中添加1.0g/L的活性炭對提高小孢子胚芽誘導(dǎo)率沒有明顯效果，但能有效減輕胚芽的玻璃化；添加5.0或7.0mg/L的AgNO3對小孢子胚芽誘導(dǎo)有顯著效果。染色體倍性鑒定結(jié)果表

4、明：不結(jié)球白菜小孢子植株的染色體自然加倍率較高，在50％～100％之間；不同基因型不結(jié)球白菜小孢子植株的倍性變異具有多樣性；在部分基因型中嵌合體占較高比例，最高達(dá)到42.86％。
　　 3、為了解游離小孢子胚胎發(fā)生的分子機(jī)制，以‘五月慢’為試材，利用cDNA-AFLP技術(shù)分離與小孢子胚胎發(fā)生相關(guān)的特異表達(dá)片段，并進(jìn)行克隆與分析。通過256對引物組合的篩選，共分離得到94個(gè)與小孢子胚胎發(fā)生相關(guān)的表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)，對其中15個(gè)