大白菜游離小孢子培養(yǎng)及其胚胎發(fā)生和加倍機理的研究.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)技術在植物育種以及相關的基礎研究中具有廣闊的應用前景，近年來這一技術在蕓薹屬植物中得到迅速發(fā)展。為了進一步完善大白菜游離小孢子培養(yǎng)體系，本試驗以不同胚誘導能力的基因型大白菜為試材，針對培養(yǎng)體系中的預處理方法、胚胎移植成苗培養(yǎng)方法等進行了新的嘗試與改良；通過細致的顯微觀察，對大白菜小孢子離體培養(yǎng)過程中的胚胎發(fā)生和自然加倍機理進行研究與探討。 大白菜小孢子提取過程中進行短期的預處理，增加B5提取培養(yǎng)基的蔗糖濃度、添加適

2、當濃度的甘露醇不會影響小孢子的活力，卻潛在影響了后期小孢子培養(yǎng)的脫分化，明顯提高了離體小孢子培養(yǎng)的胚胎誘導率。B5提取培養(yǎng)基兩組處理中，蔗糖濃度為17％和甘露醇濃度8％的處理效果最好，各材料每皿平均出胚量與對照相比都達到極顯著水平。參試的9份材料顯示兩組處理都有效的提高了大白菜小孢子的出胚量，但大白菜基因型仍然是影響小孢子胚胎發(fā)生的主要因素。 大白菜小孢子子葉期胚移植成苗實驗表明，子葉期胚直接轉入B5固體培養(yǎng)基進行25℃/16h

3、光照培養(yǎng)，大多數(shù)胚狀體子葉變肥厚，愈傷化，往往要通過二次分化才能發(fā)育為正常植株。對5份參試材料培養(yǎng)的子葉期胚進行4℃低溫前處理，低溫處理雖然不能完全克服大白菜不同基因型子葉期胚向植株移植培養(yǎng)的差異，但能有效降低培養(yǎng)過程胚的死亡率，與對照相比都不同程度提高了胚狀體的成苗率，同時大部分子葉期胚能不經過二次分化而快速的生長為正常植株。比較各處理8周的培養(yǎng)結果，4℃低溫10天處理與對照相比在子葉期胚的成苗率和死亡率上都達到最佳效果。 通

4、過顯微觀察，誘導適期的大白菜小孢子是成功獲得胚狀體的前提，單核靠邊期小孢子經熱激誘導啟動的標志是圓球型小孢子體積明顯膨大，同時觀察到細胞核發(fā)生自然加倍，單核小孢子變?yōu)槎扼w的單細胞。說明大白菜小孢子在培養(yǎng)初期就可能完成胚胎的自然加倍。顯微觀察發(fā)現(xiàn)熱激誘導啟動下，大白菜小孢子的胚胎發(fā)育途徑是幾種方式并存的，但以B途徑為主要發(fā)育途徑，此外還存在少量的A途徑發(fā)育和不對稱分裂的細胞團。啟動后以B途徑為主要發(fā)育途徑的大白菜小孢子離體培養(yǎng)48小時發(fā)