新型喜樹堿類化合物ZH-001的抗腫瘤活性及其分子機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：評(píng)價(jià)新型喜樹堿類化合物ZH-001的體內(nèi)外抗腫瘤活性，并探究其作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　1. ZH-001的體內(nèi)外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)：1）體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，采用四氮唑鹽還原法（MTT）或磺酰羅丹明 B蛋白染色法（SRB）來觀察ZH-001對(duì)20株人腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制作用。2)采用人結(jié)腸癌Colo205、HCT-116、SW-620和人肺癌NCI-H460裸小鼠移植瘤模型，評(píng)價(jià)ZH-001體內(nèi)抗腫瘤活性

2、。
　　2. ZH-001的抗腫瘤作用機(jī)制研究：1）瓊脂糖凝膠電泳法檢測ZH-001對(duì)Topoisomerase I活性的影響。2）流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合PI單染，檢測ZH-001作用后，腫瘤細(xì)胞周期的變化情況。3）Western blotting法檢測ZH-001作用后細(xì)胞內(nèi)周期、凋亡相關(guān)蛋白和γ-H2AX的表達(dá)情況。
　　研究結(jié)果：
　　1. ZH-001在體內(nèi)外具有高效的抗腫瘤活性：1) ZH-001對(duì)20株不同組織來源

3、的人腫瘤細(xì)胞，均有明顯的增殖抑制作用，半數(shù)抑制濃度（IC50）為3.46-259.76 nM。陽性對(duì)照TPT和SN-38的IC50分別為11.34-1814.42 nM和6.05-1169.66 nM。2)在人結(jié)腸癌Colo205裸小鼠移植瘤模型中，ZH-0011.6 mg/kg組與陽性對(duì)照CPT-112.5 mg/kg組治療作用相似；在HCT-116和SW-620人結(jié)腸癌裸小鼠移植瘤模型中， ZH-001最低有效劑量為0.8 mg/k

4、g，小于陽性對(duì)照組；在NCI-H460人肺癌裸小鼠移植瘤模型中，ZH-001能劑量依賴性的抑制腫瘤生長，但效果不如陽性藥。
　　2. ZH-001通過抑制Topoisomerase I活性、誘導(dǎo)DNA的損傷從而導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯和凋亡，最終發(fā)揮抗腫瘤活性：1) ZH-001能夠抑制Topo I的活性，能減少DNA解旋，效果類似于SN-38，強(qiáng)于TPT。2）ZH-001能夠上調(diào)γ-H2AX的表達(dá)，誘導(dǎo)DNA損傷，作用與TPT和SN-3

5、8相當(dāng)。3) ZH-001能夠誘導(dǎo)HCT-116發(fā)生G2/M期阻滯，且呈時(shí)間依賴性增加，其效應(yīng)與SN-38相當(dāng)，優(yōu)于TPT。ZH-001能下調(diào)周期相關(guān)蛋白CDK1和Cyclin B1水平。4) ZH-001能上調(diào)促凋亡蛋白Bax，下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2，但促進(jìn)pro-Caspase-3下調(diào)的作用不及陽性對(duì)照SN-38。
　　結(jié)論：ZH-001具有廣譜的體外抗腫瘤活性，體內(nèi)抗腫瘤藥效優(yōu)于SN-38和TPT。ZH-001的抗腫瘤作用