水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)畢業(yè)論文-中草藥復(fù)方對(duì)鱉源致病性嗜水氣單胞菌的體外抑菌效應(yīng)

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　中草藥復(fù)方對(duì)鱉源致病性嗜水氣單胞菌的體外抑菌效應(yīng)</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí)

2、 水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</

3、b></p><p><b>　　中文摘要1</b></p><p><b>　　英文摘要2</b></p><p><b>　　1.前言3</b></p><p><b>　　2.材料與方法4</b></p><p>

4、;<b>　　2.1材料4</b></p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)方法4</b></p><p><b>　　3.結(jié)果與分析5</b></p><p>　　3.1兩味中草藥復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果5</p><p>　　3.2三味中草藥配伍組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效

5、果6</p><p>　　3.3適宜中草藥配伍組合的使用范圍7</p><p><b>　　4.討論8</b></p><p>　　4.1中草藥復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效應(yīng)特征8</p><p>　　4.2關(guān)于實(shí)驗(yàn)菌對(duì)中草藥復(fù)配組合的評(píng)價(jià)8</p><p>　　4.3關(guān)于中草藥復(fù)配組合藥效

6、的探討8</p><p><b>　　5.致謝9</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)10</b></p><p>　　[摘要] 為評(píng)價(jià)中草藥復(fù)配組合對(duì)嗜水氣單胞菌體外抑菌效果，通過黃芩、金銀花、蒲公英3味中草藥的10倍水提粉劑（按中草藥原料重量的10倍濃縮，即10克中草藥濃縮成1克的水提粉劑）對(duì)鱉源致病性嗜

7、水氣單胞菌株ZHYYZ-1（GenBank登錄號(hào)：GU563992）進(jìn)行體外抑制實(shí)驗(yàn)。采用倍比稀釋法和平板法測(cè)定各藥液對(duì)體外培養(yǎng)的嗜水氣單胞菌的MIC及MBC值，為金銀花1.56 mg/ml、黃芩1.56mg/ml、蒲公英3.12mg/ml，并分別記做1個(gè)單方藥物濃度單位。通過測(cè)定（1A ,0.8A+0.2B，0.6A+0.4B，0.4A+0.6B， 0.2A+0.8B,1B）（例如黃芩與金銀花進(jìn)行復(fù)配，則1A=1h=1.56mg/ml

8、，1B=1j=1.56 mg/ml）單方兩兩復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的殺滅作用，篩選出對(duì)實(shí)驗(yàn)菌具明顯抑菌效果的蒲公英與黃芩組合（0.2p+0.8h、0.4p+0.6h、0.6p+0.4h，依次記為A、B、C）和黃芩與金銀花組合（0.4h+0.6j、0.6h+0.4j、0.8h+0.2j，依次記為D、E、F），開展A、B、C、D、E、F間(例如A與D復(fù)配，則A=0.2p+0.8</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 黃芩 金銀

9、花 蒲公英 嗜水氣單胞菌ZHYYZ-1 </p><p>　　Chinese Herbal Medicine on turtle Pathogenic Aeromonas hydrophila, the inhibition</p><p>　　[Abstract] To evaluate the combination of Chinese herbal compound on th

10、e bacteria Aeromonas hydrophila Bacteriostatic effect, through the skullcap, honeysuckle, dandelion 3 herbs mentioned 10 times of water powder (herbal raw materials by 10 times the weight of concentrate, or 10grams to 1

11、gram of concentrated herbal water extract powder) on the turtle pathogenic strains of Aeromonas hydrophila ZHYYZ-1 (GenBank accession number: GU563992) inhibition in vitro.By dilution plate method and determin</p>

12、<p>　　[Keywords] Scutellaria Honeysuckle Dandelion</p><p>　　Aeromonas hydrophila ZHYYZ-1 </p><p><b>　　1.前言</b></p><p>　　中華鱉（Trionyx sinensis）俗稱鱉、甲魚、團(tuán)魚等，隸屬

13、于爬行綱、龜鱉目、鱉科、鱉屬，具很高的營(yíng)養(yǎng)、經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值，深受廣大消費(fèi)者青睞，是當(dāng)前我國(guó)最重要的淡水養(yǎng)殖品種之一。目前中華鱉各種疾病的頻繁爆發(fā)，已成為限制中華鱉養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的主要瓶頸之一[1]。</p><p>　　嗜水氣單胞菌(Aleromonas hydrophila)為水域常在菌，致病性嗜水氣單胞菌既是引起淡水養(yǎng)殖動(dòng)物暴發(fā)性死亡的主要病原，也是淡水養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病中經(jīng)濟(jì)損失最為嚴(yán)重的致病菌[2]。研

14、究表明，該菌對(duì)淡水魚感染率高達(dá)90%以上，死亡率高達(dá)65%以上，其既是引起養(yǎng)殖中華鱉爆發(fā)性死亡的主要病原，也是養(yǎng)殖中華鱉細(xì)菌性疾病中經(jīng)濟(jì)損失最為嚴(yán)重的致病菌之一[3]。在目前已報(bào)道的25種中華鱉疾病中，由其引起的鱉病就達(dá)15種之多[4]。無疑，獲取有效抑制該菌的藥物制劑具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。</p><p>　　近四十年來，國(guó)內(nèi)外有關(guān)嗜水氣單胞菌的防治仍以藥物防治為主，但由于養(yǎng)殖生產(chǎn)上濫用抗生素、違禁藥物的嚴(yán)重存在

15、，已造成抗藥性菌株出現(xiàn)、污染環(huán)境、鱉肉質(zhì)下降等不良后果[5,6]。尤其是Rijker等發(fā)現(xiàn)，使用土霉素能夠抑制哺乳動(dòng)物的體液免疫，口服抗生素在對(duì)致病菌產(chǎn)生殺傷或抑制作用的同時(shí)也會(huì)影響動(dòng)物體內(nèi)正常微生物的種群，甚至破壞體內(nèi)的微生態(tài)平衡。為保障食品安全，國(guó)內(nèi)在一大批常用藥物被禁用同時(shí)，并未給出那些禁用藥物的替代品，致使屢禁屢用現(xiàn)象不斷升級(jí),未禁用的部分抗生素和消毒劑因長(zhǎng)期使用，已產(chǎn)生抗藥性并影響產(chǎn)品質(zhì)量。故開發(fā)不耐藥的、安全度高的抗菌藥物也

16、就顯得十分重要和必要。</p><p>　　中草藥是中藥和草藥的總稱[7,8], 是指在中國(guó)物性理論(陰陽五行學(xué)說)指導(dǎo)下用于防治人和動(dòng)物疾病、促進(jìn)健康、提高生產(chǎn)性能和動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量的天然物質(zhì)[9]。我國(guó)是中草藥的發(fā)源地，古代先賢對(duì)中草藥和中醫(yī)藥學(xué)的深入探索、研究和總結(jié)，使得中草藥得到了最廣泛的認(rèn)同與應(yīng)用，它具有天然性、多功能性、無毒副殘留性、無抗藥性、雙向調(diào)節(jié)性、免疫性等多種優(yōu)點(diǎn)[10,11]。在當(dāng)前全面提倡健康

17、養(yǎng)殖的新形勢(shì)下，推廣中草藥防治鱉病，能提高養(yǎng)殖中華鱉的免疫功能和抗病能力，而備受人們的關(guān)注[12,13]。實(shí)踐證明，中草藥是一類極有開發(fā)前景很好的純天然漁藥資源。</p><p>　　目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)鱉源致病性嗜水氣單胞菌的研究多集中于生物學(xué)特征[14]、病原分離與鑒定[15,16,17]、病理觀察[18]、毒力因子及致病力[19,20]、病原檢測(cè)[21,22,23]以及免疫防病[24,25]等方面。陳超然報(bào)道，

18、在中華鱉稚鱉飼料中添加35mg/kg·d的甘草素，不僅具有提高供試中華鱉免疫應(yīng)答水平，改善肝功能,增強(qiáng)抗嗜水氣單胞菌感染的能力，同時(shí)還具有明顯的促生長(zhǎng)作用[26]。吳德鋒等在鱉飼料中添加由連翹、板藍(lán)根、金銀花等10多種中藥組成的復(fù)方中藥添加劑，治療鱉白點(diǎn)病、紅脖子病等效果顯著。而有關(guān)防控水生動(dòng)物嗜水氣單胞菌病的中草藥復(fù)配組合物間比例關(guān)系的優(yōu)化研究尚未見報(bào)道。</p><p>　　鑒于此，作者于2010年

19、7-12月以浙江海洋學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室安全養(yǎng)殖分室提供的鱉源致病性嗜水氣單胞菌ZHYYZ-1為實(shí)驗(yàn)菌，在完成對(duì)致病性嗜水氣單胞菌有顯著抑菌效果的9種中草藥單方實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，篩選出具顯著抑制效果的3味中草藥黃芩、金銀花、蒲公英，開展中草藥復(fù)方對(duì)致病性嗜水氣單胞菌抑菌效果的篩選與評(píng)價(jià)研究，以期為水產(chǎn)動(dòng)物嗜水氣單胞菌藥物制劑的開發(fā)提供基礎(chǔ)資料。</p><p><b>　　2.材料與方法</b>&

20、lt;/p><p><b>　　2.1材料</b></p><p><b>　　2.1.1實(shí)驗(yàn)菌</b></p><p>　　以鱉源致病性嗜水氣單胞菌ZHYYZ-1為實(shí)驗(yàn)菌，由浙江海洋學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室安全養(yǎng)殖分室提供，為致病性強(qiáng)毒株。接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，30℃振蕩培養(yǎng)24h后用無菌生理鹽水（0.85%NaCl）制成不同

21、濃度的菌懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。</p><p>　　2.1.2培養(yǎng)基與中草藥</p><p>　　中草藥黃芩、金銀花、蒲公英均購(gòu)自舟山同仁堂。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(含2％NaC1)、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(含2％NaC1)均選購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。</p><p><b>　　2.1.3實(shí)驗(yàn)儀器</b></p><p>　　生化培養(yǎng)箱

22、（型號(hào)SHP-750）、雙人單面凈化工作臺(tái)（型號(hào)SW-CJ-2FD）、立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器（型號(hào)LDZX-40SAI）等。</p><p><b>　　2.2實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1菌懸液和含藥平板的制備</p><p>　　實(shí)驗(yàn)菌鱉源強(qiáng)致病性嗜水氣單胞菌ZHYYZ-1經(jīng)30℃斜面培養(yǎng)18h后，用無菌生理鹽水洗下菌

23、苔，依次制成菌濃度為1.0×104cfu/ml、1.0×105cfu/ml、1.0×106cfu/ml 、1.0×107 cfu/ml的懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　　取各實(shí)驗(yàn)藥物10倍水提物10g，80目過篩，分別加400mL蒸餾水加熱使其完全溶解，藥物濃度為0.025g/mL，然后取出200mL，加入200mL蒸餾水，充分混勻，再取出200mL，如此稀釋各藥物

24、至對(duì)104菌液最小抑菌濃度的下一個(gè)濃度水平，并制成一定濃度的母液；采用2倍稀釋法，用蒸餾水梯次稀釋母液至藥物最小抑菌濃度（菌懸液濃度為1.0×104cfu/ml）的一半；設(shè)置若干藥液體積梯度，依次加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂并加熱溶解，121℃高壓滅菌20min，無菌操作，制成不同濃度的含藥平板，30℃過夜培養(yǎng)。</p><p>　　2.2.2最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定 </p>

25、<p>　　將制備好的菌液濃度為104-107g/mL的菌懸液，依次均勻涂布于各含藥平板（100µl菌液/塊），30℃恒溫培養(yǎng)24h后測(cè)定各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)不同濃度菌液的最小抑菌濃度（以含藥平板上殘留菌落數(shù)小于10個(gè)菌落的藥物濃度作為該藥物的最小抑菌濃度）和最小殺菌濃度（以實(shí)驗(yàn)菌殺滅率達(dá)到90%的藥物濃度為最小殺菌濃度），結(jié)果見表1。</p><p>　　表1：?jiǎn)挝吨胁菟帉?duì)不同濃度菌液的MIC和M

26、BC（mg/mL）</p><p>　　Table 1: Single Chinese herbs broth with different concentrations of </p><p>　　the MIC and MBC (mg / mL)</p><p>　　2.2.3 中草藥復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果實(shí)驗(yàn)及評(píng)價(jià)方法</p><p&g

27、t;　　由表1知，金銀花、黃芩、蒲公英的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）值為金銀花1.56 mg/ml、黃芩1.56mg/ml、蒲公英3.12mg/ml。將1.56 mg/ml金銀花（記做1j）、1.56mg/ml黃芩（記做1h）、3.12mg/ml蒲公英（記做1P）分別記做1個(gè)單方藥物濃度單位。以加和等藥物濃度方式設(shè)置兩味中草藥聯(lián)合藥物濃度梯度【(兩味藥物濃度加和方式依次為1A ,0.8A+0.2B，0.6A+0.4B，

28、0.4A+0.6B， 0.2A+0.8B,1B，其中第1組和最后1組為對(duì)照組），（例如黃芩與金銀花進(jìn)行復(fù)配，則1A=1h=1.56mg/ml，1B=1j=1.56 mg/ml）】，各梯度組總藥物濃度為1個(gè)藥物濃度單位,組內(nèi)設(shè)平行組,采用最小殺菌濃度測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定其對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的殺滅作用。根據(jù)復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的殺菌抑制效果，若其抑制效果等于對(duì)照組,表明其具有加和作用;若其抑制效果大于對(duì)照組,表明具有協(xié)同作用;若小于其抑制效果較高者,則表明

29、具有拮抗作用;若大于或等于其抑制效果較高者,而小于對(duì)照組,則表明抑制作用具有相互獨(dú)立性。</p><p>　　根據(jù)兩味中草藥的復(fù)配組合抑菌試驗(yàn)結(jié)果,篩選出對(duì)實(shí)驗(yàn)菌具有明顯抑菌效果的復(fù)配組合，再將其開展三味中草藥配伍組合的殺菌效果評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)及評(píng)價(jià)方法同兩味中草藥復(fù)配組合抑制試驗(yàn)相同），獲取抑制嗜水氣單胞菌病的中藥劑配方。為進(jìn)一步獲取中藥劑配方適宜的使用范圍，再設(shè)置菌濃度為1×103cfu/ml、1&#

30、215;104cfu/ml、1×105cfu/ml 三個(gè)組別，并相應(yīng)稀釋中藥劑配方藥物濃度，稀釋倍數(shù)為2倍、4倍、10倍，采用最小殺菌濃度測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法，最終得到適宜的中藥劑配方使用范圍。</p><p><b>　　3.結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1兩味中草藥復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果</p><p>　　由表2可見，

31、復(fù)配組合蒲公英和黃芩、黃芩和金銀花對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果作用明顯，尤其在復(fù)配組合（0.4蒲公英+0.6黃芩、0.6黃芩+0.4金銀花）中出現(xiàn)對(duì)菌株有殺滅作用，這表明復(fù)配組合后，其藥性加強(qiáng)，表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)。當(dāng)兩味中草藥復(fù)配組合的藥量相差不大時(shí)，協(xié)同效應(yīng)更為明顯，其抑菌和殺菌能力均大于單藥抗菌效果，抑菌作用并非單味中草藥抑菌效果的簡(jiǎn)單加和。</p><p>　　在不同實(shí)驗(yàn)菌濃度下，同一復(fù)配中草藥對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果不同。3

32、個(gè)復(fù)配組中都隨著菌液濃度的增加而出現(xiàn)明顯的抑制效果作用減弱的現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)菌濃度在1×105cfu/ml時(shí)，3個(gè)復(fù)配組合中都出現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的殺滅效果作用，表現(xiàn)出協(xié)同作用；實(shí)驗(yàn)菌濃度在1×106cfu/ml時(shí)，3個(gè)復(fù)配組合中對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果作用相差不大，但仍表現(xiàn)出協(xié)同作用；而當(dāng)實(shí)驗(yàn)菌濃度在1×107cfu/ml時(shí)，蒲公英和金銀花復(fù)配的培養(yǎng)平板中的實(shí)驗(yàn)菌成長(zhǎng)為無數(shù)小菌落、片狀菌苔等，表明其抑制效果為拮抗作用。3個(gè)復(fù)

33、配組中黃芩和金銀花的效果最為明顯，藥平板殘留的菌落數(shù)量均小于等于106.3±7.4個(gè)/塊平板，甚至出現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的殺滅效果作用。</p><p>　　在相同實(shí)驗(yàn)菌濃度下，不同復(fù)配中草藥對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果也是不同的。復(fù)配組合蒲公英和黃芩、黃芩和金銀花在實(shí)驗(yàn)菌濃度為1×105cfu/ml、1×106cfu/ml、1×107cfu/ml時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)菌都有明顯的抑制效果，但是復(fù)配組中隨

34、著黃芩的用量的減少，其抑菌效果有減弱的趨勢(shì)，但仍表現(xiàn)為協(xié)同作用；復(fù)配組合蒲公英和金銀花（0.2p+0.8j、0.4p+0.6j）在實(shí)驗(yàn)菌濃度為1×105cfu/ml、1×106cfu/ml時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)菌有抑制效果，表現(xiàn)為協(xié)同作用，但復(fù)配組合蒲公英和金銀花（0.6p+0.4j、0.8p+0.2j）在實(shí)驗(yàn)菌濃度為1×107cfu/ml時(shí)，實(shí)驗(yàn)菌數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)照組，對(duì)實(shí)驗(yàn)菌沒有抑制作用，表現(xiàn)為拮抗作用。</p

35、><p>　　表2：兩味中草藥復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果</p><p>　　Table 2: combination of two herbs mixed inhibitory effect of the experimental strains</p><p>　　注：j代表金銀花（1.56 mg/ ml），p代表蒲公英（3.12mg/ ml），h代表黃芩（1.56

36、mg/ ml)</p><p>　　3.2三味中草藥配伍組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果</p><p>　　由表3可見，蒲公英、金銀花、黃芩三味中草藥配伍中的（0.08p+0.60h+0.32j）與（0.16p+0.60h+0.24j）這兩個(gè)配伍組合的殺菌率均達(dá)到99%以上，故可將其作為作為治療淡水養(yǎng)殖動(dòng)物嗜水氣單胞菌病重癥的中藥配方， 黃芩、金銀花、蒲公英三者復(fù)配的質(zhì)量百分比依次為（51.7-5

37、5.6）%、（20.7-29.6）%和（14.8-27.6）%，這一結(jié)果也完全符合中藥的“性味歸經(jīng)”和“君臣佐使”配伍原理，即：由表2可見，蒲公英與黃芩組合（0.2p+0.8h、0.4p+0.6h、0.6p+0.4h，依次記為A、B、C）、黃芩與金銀花組合（0.4h+0.6j、0.6h+0.4j、0.8h+0.2j，依次記為D、E、F）對(duì)實(shí)驗(yàn)菌有極為顯著的強(qiáng)抑菌作用，而金銀花與蒲公英組合對(duì)菌濃度1×107cfu/ml組別有較強(qiáng)

38、的殺滅拮抗作用。故三者配伍時(shí)應(yīng)將黃芩作為君藥，金銀花為臣藥（其殺菌能力與黃芩等同，且明顯強(qiáng)于蒲公英，見表2）、蒲公英為佐藥（殺菌能力相對(duì)較弱，且與金銀花有弱拮抗效應(yīng)，見表2）。</p><p>　　表3：三味中草藥配伍組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的殺滅率(%) </p><p>　　Table 3: Compatibility of Chinese herbal combination of shamis

39、en,the killing of experimental strain rate (%)</p><p>　　注：j代表金銀花（1.56 mg/ ml），p代表蒲公英（3.12mg/ ml），h代表黃芩（1.56mg/ ml)</p><p>　　3.3適宜中草藥配伍組合的使用范圍</p><p>　　由表4知，將復(fù)配組合(0.08p+0.60h+0.32j)與

40、（0.16p+0.60h+0.24j）藥液濃度稀釋倍數(shù)為4倍時(shí)，在不同的菌液濃度下，其殺菌率仍可達(dá)90%以上。表明此復(fù)配組合具有很強(qiáng)的殺菌效果，在實(shí)際養(yǎng)殖中，可適當(dāng)稀釋用來預(yù)防和治療輕度的淡水養(yǎng)殖動(dòng)物嗜水氣單胞菌病。</p><p>　　表4：蒲公英、黃芩、金銀花三方不同配比組合的殺菌率（%）</p><p>　　Table 4: dandelion, skullcap, honeysuc

41、kle combination of three different sterilization rate ratio (%)</p><p>　　注：j代表金銀花（1.56 mg/ ml），p代表蒲公英（3.12mg/ ml），h代表黃芩（1.56mg/ ml)</p><p><b>　　4.討論</b></p><p>　　4.1中草藥復(fù)

42、配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效應(yīng)特征</p><p>　　中草藥配伍有兩層含義: 一是指中藥學(xué)中的配伍,即按病情需要和藥性特點(diǎn), 將兩種以上藥物配合使用；二是指在方劑學(xué)中的配伍, 即藥物按君臣佐使的法度加以組合并確定一定的比例[26]。藥物通過配伍, 能增效、減毒、擴(kuò)大治療范圍, 適應(yīng)復(fù)雜病情及預(yù)防藥物中毒。中草藥的配伍絕不是藥物之間的簡(jiǎn)單相加[27]。</p><p>　　兩味中草藥復(fù)配組合屬于

43、中藥學(xué)中的配伍，即將蒲公英、黃芩、金銀花按不同的質(zhì)量比例直接復(fù)配組合用于實(shí)驗(yàn)。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，不同實(shí)驗(yàn)質(zhì)量比例梯度組的抑菌效果存在差異，將蒲公英、黃芩、金銀花中兩兩復(fù)配時(shí)，有較強(qiáng)抑菌能力的一方作為主藥，另一方作為配藥，則抑菌強(qiáng)度為黃芩=金銀花＞蒲公英（見表1），當(dāng)兩味中草藥復(fù)配組合時(shí)，主藥與配藥比例大于1時(shí)，抑菌效果明顯（見表2）。隨著主藥與配藥的質(zhì)量比例在增大時(shí)，復(fù)配組合對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果越顯著，這與表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。<

44、/p><p>　　三味中草藥配伍組合屬于方劑學(xué)中的配伍。即藥物按君臣佐使的法度加以組合并確定一定的比例，故三者配伍時(shí)應(yīng)將黃芩作為君藥，金銀花為臣藥（其殺菌能力與黃芩等同，且明顯強(qiáng)于蒲公英，）、蒲公英為佐藥（殺菌能力相對(duì)較弱，且與金銀花有弱拮抗效應(yīng)，見表2）。根據(jù)蒲公英、黃芩、金銀花的性味歸經(jīng)，三味中草藥配伍組合質(zhì)量比例關(guān)系為黃芩＞金銀花＞蒲公英時(shí)，其抑制效果較明顯，這與表3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。</p>&l

45、t;p>　　4.2關(guān)于實(shí)驗(yàn)菌對(duì)中草藥復(fù)配組合使用范圍的評(píng)價(jià)</p><p>　　單味中草藥對(duì)實(shí)驗(yàn)菌均有抑制作用，但因各中草藥的主要成分不同，導(dǎo)致對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑制效果強(qiáng)度不同，為克服這一缺點(diǎn)，可將性味歸經(jīng)相似的中草藥配伍，即性能功效相類似的藥物配合應(yīng)用，可以增強(qiáng)原有療效[28]。使之形成協(xié)同作用，加強(qiáng)抑菌效果。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)菌對(duì)中草藥配伍組合使用范圍很廣，不管單味還是配伍都能

46、有抑菌效果，但配伍組合的效果一般強(qiáng)于單味藥物。因中草藥成分復(fù)雜，當(dāng)配伍的中草藥相惡時(shí)，兩藥合用，一種藥物能使另一種藥物原有功效降低，甚至喪失（表3與表2相比可得）?？梢姡瑢?shí)驗(yàn)菌對(duì)中草藥的配伍還是有一定的使用范圍的，選擇配伍的中草藥要性味歸經(jīng)相似為好。</p><p>　　4.3關(guān)于中草藥復(fù)配組合藥效的探討</p><p>　　中草藥配伍組合不是簡(jiǎn)單的加和作用，應(yīng)將配伍組合的相互作用歸為以下

47、4 種基本方式: (1)若其抑菌效應(yīng)等于對(duì)照組,表明具有加和作用；(2)若大于對(duì)照組,表明具有協(xié)同作用；(3) 若小于其抑菌強(qiáng)度較高者,則表明具有拮抗作用；(4)若大于或等于其抑菌強(qiáng)度較高者,而小于對(duì)照組,則表明抑制作用具有相互獨(dú)立性。 </p><p>　　試驗(yàn)中的三味中草藥蒲公英、黃芩、金銀花，據(jù)《中華本草》介紹，蒲公英，性味，苦甘，寒；金銀花，性味，甘，寒；黃芩，性味，苦，寒[29]。其性味歸經(jīng)相似，但配伍

48、時(shí)藥物按君臣佐使的法度加以組合并確定的比例不同，其有些組合的抑菌效果并不都比兩味中草藥復(fù)配組合或單味中草藥的抑制效果強(qiáng)（見表2、3）。因中草藥成分復(fù)雜多樣，根據(jù)中草藥配伍關(guān)系及作用原理可知，配伍時(shí)關(guān)系主要有相須、相使、相畏、相殺、相惡和相反六個(gè)方面，只有當(dāng)配伍的中草藥性味歸經(jīng)相似時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)藥效增強(qiáng)，即為協(xié)同或加和作用。否則藥效則會(huì)減弱或維持藥效強(qiáng)度，即為拮抗或獨(dú)立作用。</p><p>　　鑒于目前，對(duì)防治鱉源

49、致病性嗜水氣單胞菌的最佳中草藥配伍組合在中華鱉細(xì)菌性疾病中的開發(fā)應(yīng)用還處于摸索階段。而且中草藥的組成成分復(fù)雜，其具體成分、作用方式和機(jī)理如何,仍有待于進(jìn)一步研究。</p><p><b>　　[參 考 文 獻(xiàn)]</b></p><p>　　[1]鞠長(zhǎng)增.鱉的養(yǎng)殖與疾病防治[M].鄭州: 河南科學(xué)技術(shù)出版社, 1997112521281</p><p

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59、成都中醫(yī)藥大學(xué)2005年.</p><p>　　[27]于虹,天津中醫(yī)學(xué)院,中藥配伍理論的應(yīng)用意義.中草藥,2003.</p><p>　　[28]儲(chǔ)岳峰,顏新敏,胡元亮,等.幾種中藥成分的免疫增強(qiáng)活性及其作用效果[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2005,35(1):67-70.</p><p>　　[29]《中華本草》,國(guó)家中醫(yī)藥管理局,編委會(huì),出版社：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，