大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌抑菌機(jī)制的研究.pdf

1、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）和乙型鏈球菌（beta hemolytic streptococcus）是水產(chǎn)動物的常見致病菌，對人類健康和水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)帶來巨大威脅。由于抗生素的濫用，藥物殘留和耐藥性變得日益嚴(yán)重。人們迫切需要尋找不易產(chǎn)生耐藥性的，低毒的新型抗菌物質(zhì)。本研究以70％乙醇提取的大黃（Rhubarb）為抑菌材料，從抑菌圈、最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）方面探討了大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙

2、型鏈球菌生長的影響。通過電子掃描顯微鏡、測定菌液中蛋白濃度變化、聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定（MS）、雙向凝膠電泳（2-DE）等方法研究了大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的抑制機(jī)制。
　　1、抑菌結(jié)果顯示，大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的抑制效果明顯，其抑菌圈大小分別為24.5±0.2mm和23.0±0.2mm。大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的MIC和MBC都是3.91mg/mL。

3、　　2、應(yīng)用了掃描電鏡觀察大黃醇提物對嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)1/2MIC大黃醇提物處理后，嗜水氣單胞菌菌體表面變粗糙，出現(xiàn)裂解并且菌液的蛋白含量明顯升高；乙型鏈球菌菌體表面雖然皺褶，但是形態(tài)依然完整，菌液中的蛋白含量也沒有明顯變化。說明大黃醇提物對嗜水氣單胞菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜有一定的破壞作用，而對乙型鏈球菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜影響很小。
　　3、通過SDS-PAGE和可溶性蛋白含量測定分析大黃醇提

4、物對細(xì)菌蛋白表達(dá)的作用，結(jié)果表明：1）經(jīng)大黃醇提物處理后，嗜水氣單胞菌的蛋白表達(dá)量在4 h時產(chǎn)生明顯變化（P<0.05），再經(jīng)2-DE電泳進(jìn)行特異性蛋白的分離，并用質(zhì)譜鑒定，發(fā)現(xiàn)了三個差異性蛋白：分別為轉(zhuǎn)錄延長因子GreA（transcription elongation factor GreA），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase），烷基氫過氧化物還原酶亞基C（alkyl hydroperoxide reduct

5、ase subunit C），這3個蛋白對細(xì)菌的正常生理及其結(jié)構(gòu)極為重要。2）經(jīng)大黃醇提物處理后，乙型鏈球菌蛋白表達(dá)量受到的影響不明顯，但SDS-PAGE圖譜上，發(fā)現(xiàn)了多條缺失條帶。通過2-DE電泳進(jìn)行特異性蛋白的分離，并用質(zhì)譜鑒定了這些差異性蛋白分別為磷酸丙酮酸水合酶（phosphopyruvate hydratase）、丙酮酸脫氫酶E1（pyruvate dehydrogenase(acetyl-transferring)E1）、磷

6、酸甘油變位酶（phosphoglyceromutase）、磷酸甘油酸激酶（phosphoglycerate kinase[Bacilli]）、3-磷酸甘油醛脫氫酶（type Iglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase[Bacilli]）、轉(zhuǎn)酮醇酶（transketolase）、氨基甲酸激酶1（carbamate kinase1）、蛋白核糖體蛋白S2（30S ribosomal protein S2

7、[Bacilli]）、60kD伴侶蛋白（60kD chaperonin）和假定蛋白（hypothetical protein）。通過查閱文獻(xiàn)可知，前7種酶是微生物糖酵解、氨基酸代謝及戊糖磷酸途徑中必須的；蛋白核糖體蛋白S2和60KD伴侶蛋白主要與蛋白合成和折疊有關(guān)；而假定蛋白具體功能未知。
　　綜上所述，大黃醇提物能有效抑制嗜水氣單胞菌和乙型鏈球菌的生長。但作用方式不同，大黃醇提物對嗜水氣單胞菌的抑制機(jī)制是破壞細(xì)胞膜的完整性和影響