免疫膠體金技術(shù)

1、膠體金免疫技術(shù) colloidal gold Immune technique,許贇興 2018年3月,膠體金標(biāo)記技術(shù)的相關(guān)定義,膠體金免疫技術(shù) 是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金 是指金鹽在還原劑作用下還原成金原子，聚合成一定大小（呈色不同）的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。免疫金 實(shí)質(zhì)上是膠體金與抗原或抗體等大分子物質(zhì)的結(jié)合物。,膠體金顆粒帶電情況 

2、      抗體和金顆粒的耦聯(lián)（圖出處：IVD Technology）,Synthesis and properties of different particle size,Adjust the gold colloid to the proper pH,膠體金與蛋白質(zhì)的結(jié)合成功與否，取決于pH值，一般只有在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(PI)略偏堿的條件下二者才能牢固地結(jié)合，因此，標(biāo)記

3、之前須將膠體金溶液的pH值調(diào)至待標(biāo)記蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)略偏堿。,膠體金技術(shù)的種類及優(yōu)點(diǎn),快速免疫金滲濾法(immuogold filtration assay ,IGFA) ——斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫測(cè)定。 主要由兩部分組成：膜滲濾裝置和標(biāo)記結(jié)合物。前者為一塑料小盒，其中填滿吸水性物質(zhì)，面上緊貼放置一片吸附有抗體(以雙抗體夾心法測(cè)抗原為例)的硝

4、酸纖維膜，標(biāo)記結(jié)合物為免疫金。,,A：金標(biāo)記抗體B：標(biāo)本中的抗原C：包被抗體D：NC膜E：吸水材料F：塑料盒,順序：標(biāo)本——免疫金——洗滌液陽性：紅色斑點(diǎn)間接法：包被抗原，少用,,,免疫層析法( immunochromatogra-phy，ICA) 是繼IGFA之后發(fā)展起來的另一種固相膜免疫測(cè)定，與IGFA利用微局限性膜的過濾性能不同，免疫層析法中滴加在膜一端的樣品溶

5、液受膜的毛細(xì)管作用(基于層析作用的橫流 （lateral flow） )向另一端移動(dòng)。移動(dòng)過程中被分析物 與固定在膜上某一區(qū)域的受體(抗原或者抗體)結(jié)合而被固相化，無關(guān)物質(zhì)則越過該區(qū)域而被分離，然后通過標(biāo)記物顯色來判定試驗(yàn)結(jié)果，以膠體金為標(biāo)記物的實(shí)驗(yàn)稱為膠體金免疫層析試驗(yàn)。,雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、間接法,,膠體金免疫層析法試劑的組成,樣品墊(Sample pad)： 玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙、無紡布等多種材質(zhì)，多種規(guī)

6、格，批間穩(wěn)定。 樣品墊的作用： 減緩樣品滲透速度，有利于樣品在結(jié)合墊上均勻分布； 去除樣品中雜質(zhì)顆粒； 調(diào)節(jié)樣品液pH值或粘度等。,結(jié)合墊(Conjugate pad)： 玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙、無紡布等多種材質(zhì)，多種規(guī)格，批間穩(wěn)定。 結(jié)合墊的作用主要為：　 　-　吸附一定量的金標(biāo)結(jié)合物顆粒；　　-　吸附并持續(xù)不斷的將樣品轉(zhuǎn)移到NC膜上；　　-　保持金標(biāo)結(jié)合物顆粒的穩(wěn)定性；　　-

7、　保證金標(biāo)結(jié)合物顆粒定量完全釋放等。,硝酸纖維素膜( Nitrocellulose)： 推薦使用Millipore，MDI，S&S，whatman 等國外公司的硝酸纖維素膜。 NC膜的作用：     - 在檢測(cè)線和對(duì)照線條帶區(qū)域固定抗體；　　-　樣品在NC膜上流動(dòng)并與試劑混合發(fā)生免疫反應(yīng)；　　-　反應(yīng)在NC膜上顯色，讀檢測(cè)結(jié)果 NC膜的重

8、要參數(shù)： 孔徑、對(duì)稱性、層析速度、表面活性劑、蛋白結(jié)合力、強(qiáng)度、表面質(zhì)量、厚度、批間均一性等。,片材： 不干膠塑料襯底，片材的質(zhì)量很大程度上影響了產(chǎn)品的貨架期。,吸收墊(Absorbent Pad)： 提供高吸收率、高容量以及相對(duì)穩(wěn)定吸收率的吸收紙； 吸收紙的作用： 主要表現(xiàn)在控制樣品的流速，促進(jìn)虹吸作用以及使試劑跨過膜而不僅僅移到膜上。,免疫膠體金技術(shù)的特點(diǎn),優(yōu)點(diǎn)：檢測(cè)方法

9、簡(jiǎn)單而快速，數(shù)分鐘即可得出結(jié)果；不需儀器設(shè)備，操作人員不需特殊訓(xùn)練；試劑穩(wěn)定，適用于單份測(cè)定；無污染。GICA的特點(diǎn)是單一試劑，一步操作。小型實(shí)驗(yàn)室即有條件開發(fā)生產(chǎn)。干燥包裝的試劑可在室溫保存一年以上。,成為目前“床旁檢驗(yàn)”（point-of-care testing，POCT）中廣為應(yīng)用的方法。,不足： 金免疫測(cè)定中應(yīng)用的是單份試劑，難于進(jìn)行質(zhì)量控制。即使是同一批生產(chǎn)的試劑，也很難保證每個(gè)試劑的同一性。因此金免疫測(cè)