流式細胞儀介紹

1、流式細胞儀產品介紹,楊海霞德國美天旎生物技術公司 (僅供內部培訓),主要內容,流式細胞儀基本原理MACSQuant流式的性能流式的競爭分析,流式細胞儀基本原理,流式細胞術（FCM）： 就是對在高速流動的鞘液包括下的細胞、粒子進行分析和分選的技術，這種細胞或粒子是經過特異熒光標記的。其特點是測量速度快，每秒鐘能測數千個乃至上萬個細胞，且可進行多參數測量。,流式細胞術的概念,流式細胞術發(fā)展趨勢,單純

2、到復雜檢測熒光參數定量手動到自動熒光試劑,,液流,檢測器,光源,電子計算機,流式細胞檢測原理,細胞可被檢測的參數(無探針標記),,,散射光信號: 細胞內在的結構參數細胞大小前向角散射 (FSC)細胞內部顆粒性側向角散射 (SSC),是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長不同。 區(qū)分陰陽性：通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標記的細胞與無熒光標記的細胞區(qū)分開來。

3、 區(qū)分陽性強弱：也可以將陽性細胞中的高FL的細胞與低FL的細胞區(qū)分開來。,相對熒光強度（FL） (需探針標記),,,,散點圖,密度圖,二維等高圖,直方圖,圖 報告中常見的幾種流式細胞圖,如何看流式圖,流式細胞術的應用,流式細胞術在細胞生物學中的應用 染色體核型分析　在分子遺傳學領域中的應用 用于性別的預選擇 在微生物學中的應用在細胞周期研究中的應用 流式細胞術在醫(yī)學中的應用在免疫學中的應用　流式細胞術在腫瘤學上

4、的應用在血液學研究中的應用 流式細胞術新的應用,流式細胞儀的臨床應用,HIV免疫分型，CD4絕對計數白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網織紅細胞計數細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關疾病,11,臨床意義,了解在不同情況下體內免疫功能狀態(tài)輔助臨床疾病的診斷探索疾病的發(fā)病機理、病程、預后監(jiān)測、指導臨床治療方案免疫系統疾病免疫缺陷病，AI

5、DS移植病人排斥反應或移植物抗宿主反應的檢測腫瘤病人化療后免疫力檢測,流式細胞儀的科研應用,樹突細胞研究干細胞研究癌癥病人的多藥耐藥性細胞周期和細胞凋亡流式細胞術與分子生物學研究細胞系的鑒定細胞內蛋白的分析細胞膜電位測定細胞內鈣離子測定,流式細胞儀潛在客戶,醫(yī)院：血液科，檢驗科，風濕免疫病科，腫瘤科，細胞治療科,開展移植（肝腎）的科室?？蒲性核按髮Ｔ盒＃好庖呦祷蛎庖邔嶒炇?，中心實驗室，分子生物學室，腫瘤研究所，血

6、液病研究所。,MACSQuant流式細胞儀——細胞分析的里程碑,多參數細胞分析,三激光紫色 (405 nm)40 mW藍色 (488 nm)25 mW紅色(635 nm)20 mW9個光學參數FSC/SSC + 7 個熒光通道,MACSQuant光路系統,MACSQuant流式細胞儀的創(chuàng)新特性： 集成，臺式數字化流式細胞儀強大并且直觀的軟件多參數：3激光，9個參數（FSC,SSC,FL1-7)12寸

7、觸摸屏（內置）不同用戶登錄模式，可用密碼進行保護2種不同的模式（針對有豐富經驗和無流式經驗的人員）分析速度可達10000個細胞/秒,無需計數微珠進行絕對計數不同的流速控制：25/50/100uL/分鐘自動化處理樣本，自動進樣，自動清潔，自動補償,自動標記矩陣補償和脫機補償小巧（60X35X40cm）、低噪、低熱。,流式細胞儀基本特征,細胞富集系統絕對計數，無需微珠自動補償自動進樣自動標記,A new milesto

8、ne in cell analysis,MACSQuant? 分析儀功能強大、操作簡單的多參數細胞分析的理想工具 (高端儀器 – 操作簡單 – 多種自動化選擇),MACS® 富集系統使用MACS微珠磁性富集細胞細胞被富集后再進行流式細胞術分析預富集的應用：內皮祖細胞檢測——頻率:每 105 PBMCs 中有1個細胞(如 CD34的預富集)腫瘤細胞檢測——頻率: 每 107 PB

9、MCs 中有1個細胞 (如 EpCAM的預富集)抗原特異性T細胞檢測——(如 CD154的預富集)成分檢測可以只檢測富集后組分或者同時檢測原始標本、陰性組分和陽性組分,MACSQuant流式細胞儀獨有特征：,高靈敏度地分析稀有細胞,每次反應后，自動計算每 µL體積中的細胞數——無須計數磁珠，細胞培養(yǎng)后往往需要細胞計數，可以完全替代細胞計數儀CD4絕對計數用于輔助HIV監(jiān)測治療CD34絕對細胞計數用于干細胞

10、移植,MACSQuant流式細胞儀獨有特征：,絕對細胞計數(容積型),自動化的多樣本處理：使用 MACS® MiniSampler 和 MACS® 冷凍試管架靈活性高，可使用不同的試管 —— 5 mL tubes ——15 mL tubes ——50 mL tubes通量高(從Chill 96 rack 到 96孔板),MACSQuant流式細胞儀獨有特征：,自動進樣,MACSQuant流

11、式細胞儀獨有特征：,自動標記,MACS微型載樣器上的試劑架，可最多放置4支染色試劑，如：PI / 7-AAD熒光素標記的抗體抗體混合物 (如MACS MC Cocktails)全系列試劑 (抗體 和試劑盒),如:MACS 對照抗體混合物:MC CD14 Monocyte Cocktail, humanMC CD19 B Cell Cocktail, humanMC CD34/CD133 Cocktail, hum

12、anMC CD34 Cocktail, human MC CD4 T Cell Cocktail, mouseMC CD90 Pan T Cell Cocktail, mouseMC CD19 B Cell Cocktail, mouse…,MACSQuant流式細胞儀獨有特征：,完全自動化的儀器設置,全自動的儀器校準 (使用 MACS Calibration Beads) 7x7 矩陣補償自動補償，對多色分析自動生

13、成補償值手動補償,儀器操作簡單、易行:溶液瓶 (1.5L) 附著在儀器兩側(通過瓶子上不同的指示燈來顯示機器狀態(tài)),結構：數字化分析速率> 10,000 events /秒流速: 25 / 50 / 100 µL/min,MACSQuant? Analyzer,自動化的儀器設置自動校準儀器（使用MACS校準微珠）自動補償7X7自動矩陣補償自動清洗自動化進樣和抗體標記帶有清洗工作站（was

14、hing station）的進樣針自動化進樣針臂（y,z方向移動）無加壓系統溶液瓶附著在儀器上儀器狀態(tài)能夠通過溶液瓶的不同顏色來指示,用戶友好的儀器操作,12‘’觸摸屏（內嵌）Live support 遠程網絡服務，德國工程師進行遠程在線檢修機器VGA 接口 (連接第二個顯示器或者代替的顯示器)功能強大、易于操作——直觀的操作界面 (用于儀器控制, 數據獲取和數據分析)——不同的用戶模式——拖拉式安裝——

15、含預設程序——在個人電腦上進行獨立數據分析——MACSQuant 數據（MQD)文件 -FCS格式-FCS3.0 -與其它流式軟件兼容,軟件基本特征,簡捷的數據處理:個人用戶登錄數據自動保存在對應的用戶文件夾中MQD – 文件 (內部格式)數據 儲存/備用: 可用硬盤驅動器 / DVD RW 驅動器, USB 接口, 以太網絡連接,軟件基本特征,軟件簡單易操作:鍵盤在顯示屏上 (觸摸式顯

16、示屏)USB接口 – 可用來連接外設的鼠標、鍵盤條形碼讀碼器,,MACSQuant? Analyzer A new milestone in cell analysis,MACSQuant? Analyzer

17、 A new milestone in cell analysis,MACSQuant? Analyzer A new milestone in cell analysis,流式相關抗體,針對流式檢測的全系列抗體。。。。,-FIT

18、C-PE-APC-Vioblue-……,北京大學人民醫(yī)院血液病研究所流式細胞儀檢測報告姓名： 性別： 年齡： 標本：病歷： 診斷： 編號：,淋巴細胞占有核細胞 %CD3+細胞占有核細胞 %CD4+細胞占有核細胞 %CD8+細胞占有核細胞 %CD14+細胞占有核細胞 %,簽名：

19、 審核者： 日期：,競爭優(yōu)勢:預富集功能，高敏感性檢測罕見細胞，比如臨床最常用的造血干細胞、腫瘤干細胞、pDC等。非常節(jié)省細胞，對于科研珍貴標本尤為重要！絕對的細胞計數，無需計數微珠，細胞培養(yǎng)后往往需要細胞計數儀，可以完全代替細胞計數儀。自動標記，自動進樣，自動清洗，節(jié)省時間。自動補償，對多色分析自動生成補償數值小巧的臺式機設計,低噪，低熱非加壓系統進樣,MACSQuant

20、? Analyzer A new milestone in cell analysis,34,(25),儀器的競爭分析,,BD的各種機型（一）,calibur,Aria,LSR II,BD的各種機型（二）,,Canto II,Influx,Beckman的各種儀器（一）,EPICS XL-ADC

21、,Cytomics FC500,Gallios,Moflo,EPICS XL-Altra,Quanta,Partec公司各種機型（適合植物學研究）,Amnis公司的ImageStreamX圖像流式細胞儀,被評為2008年度生命科學十大創(chuàng)新產品之一，是流式細胞儀上的新突破 .,Milipore公司的Guava,EasyCyte Mini/EasyCyte Plus無鞘液毛細管細胞分析儀,Accuri 的c6-流式細胞儀,,一種全功能、二激

22、光、六探測器分析流式細胞儀系統,MACSQuant® Analyzer– “add-ons”􀂃 MACS® MiniSampler􀂃 Chill Racks (Chill 5, 15, 50 or 96 well adapter)􀂃 MACSQuant® Columns􀂃 Additional years of Service

23、􀂃 Fluorochromes, MACS® Control Cocktails and Microbeads􀂃 Instrument Training􀂃 MACSQuant® Calibration Beads􀂃 MACSQuant® Starting Buffer kit􀂃 Individual Buffe

24、r/Solution boxes,,MACSQuant® Analyzers in the World􀂃 Belgium􀂃 Canada􀂃 China􀂃 France􀂃 Germany􀂃 Iceland􀂃 Ireland􀂃 Italy􀂃 Japan

25、􀂃 Russia􀂃 South Korea􀂃 Syria􀂃 United Kingdom􀂃 United States􀂃 Coming soon to the list is: Australia,Flow Cytometry Market􀂃 Estimated to be $1.5 billion

26、in 2008􀂃 (CAGR ~10-15%, $3.7 billion in 2015)􀂃 Instruments 68% - $1.02 billion􀂃 Reagents 32% - $480 million􀂃 Sales in 2009􀂃 Total – 6.1 million € (4.7 million €)𙦦

27、7; Instruments – 2.632 million € (~0.36%)􀂃 Reagents – 3.4 million € (~ 0.99%),Who buys the MACSQuant® Analyzer􀂃 Innovators are the first to purchase instruments and new gadgets􀂃 Most co

28、untries are currently selling to the early adopters􀂃 Some countries have sold a few MQ and are now selling to theresearchers who want/need greater scientific arguments􀂃 ...􀂃 Must be targete

29、d to maximize our success􀂃 Guidelines have been followed in several countries and success is seen!,What have we learned?􀂃 Miltenyi Biotec is still a new player in flow cytometry􀂃 What is the

30、 MB track record in flow cytometry?􀂃 What is the capability of MB Service (in US, EU and around the world)􀂃 MACSQuant is a huge project􀂃 Underestimated level of need on all levels􀂃

31、 We need an improved MACSQuant support structure􀂃 Combination with MACSQuant is a powerful tool􀂃 Fluorochromes􀂃 autoMACS Pro􀂃 gentleMACS􀂃 MACSQuant is the unifier of MACS

32、® brand – not the divider,Goals 2010 – MACS® Cell Analysis􀂃 Gain customer awareness in the market place􀂃 Introduce MACS Cell Analysis as a flow cytometry provider(flow cytometer, fluorochro

33、mes and kits, assays and applications)􀂃 Improve our support structure to augment the offerings􀂃 Become known as a flow cytometry company􀃆 More exposure, publications and reference customers,

34、The rules for Success – Plan, Plan, Plan􀂃 Customer must be ready to buy and have money􀂃 Contact established ~4 weeks prior􀂃 Full presentation times and practical demonstration planned 1 week

35、 prior􀂃 Ensure success - use MACS Reagents and MACS Control reagents􀂃 Day 0: set-up MQ and run calibration (no demo or training)􀂃 Day 1: Seminar and introduction of instrument􀂃 GOA

36、L: We can illustrate the effectiveness of the MQ in all 7 channels􀂃 Stain cells with our antibodies before any customer samples are run on the instrument(customer supplies unstained spleen or PBMC)􀂃