流式細(xì)胞儀在白血病免疫分型診斷

1、流式細(xì)胞儀在白血病免疫分型診斷一、概述近年來白血病的免疫分型已成為診斷血液惡性腫瘤不可缺少的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。早年曾用過的熒光顯微鏡或APAAP方法基本被廢棄。國際上公認(rèn)的通用的方法是流式細(xì)胞術(shù)（FCM）。流式細(xì)胞術(shù)白血病免疫分型是利用熒光素標(biāo)記的單克隆抗體（McAb）作分子探針，多參數(shù)分析白血病細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿或細(xì)胞核的免疫表型，由此了解被測白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及其分化程度。1流式細(xì)胞儀診斷白血病的依據(jù)⑴FCM能快速，多參數(shù)，客觀的

2、定性又定量測定細(xì)胞膜、漿、核的抗原表達(dá)⑵至今尚未發(fā)現(xiàn)白血病的特異抗原。⑶能用正常血細(xì)胞的單抗來進行免疫分型是基于白血病形成的分化阻斷學(xué)說。即白血病細(xì)胞基因異常，分化受阻于某階段形成不同亞型的白血病。這群細(xì)胞充盈于骨髓。正常血細(xì)胞從多能干細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟為功能細(xì)胞的過程中，細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或胞核抗原的出現(xiàn)、表達(dá)增多與減少甚至消失與血細(xì)胞的分化發(fā)育階段密切相關(guān)，而且表現(xiàn)出與細(xì)胞系列及其分化程度相關(guān)的特異性。因此，這些抗原的表達(dá)與否可作為鑒

3、別和分類血細(xì)胞的基礎(chǔ)。白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，在形態(tài)上變化雖相當(dāng)大，但仍能表達(dá)正常血細(xì)胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達(dá)譜對白血病進行免疫分型。2流式細(xì)胞儀診斷白血病的意義⑴骨髓血細(xì)胞是形態(tài)學(xué)分型的基礎(chǔ)，F(xiàn)CM白血病免疫分型是對形態(tài)學(xué)分型的重要補充和進一步深化，國際白血病MIC分型協(xié)作組認(rèn)為免疫分型對每一例急性白血病都是必不可少的，對下列情況意義更大：①用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色不能肯定細(xì)胞來源的白血病。②形態(tài)學(xué)為急性淋巴細(xì)胞白血

4、?。ˋLL）或急性未分化白血?。ˋUL）但缺乏特異性淋巴細(xì)胞系列抗原標(biāo)記。③混合性白血病。④部分髓系白血病。目前，免疫分型對粒細(xì)胞和單核細(xì)胞白血病的鑒別尚有一定困難。⑤慢性淋巴細(xì)胞白血病。⑥微小殘留白血病。⑵臨床預(yù)測；可根據(jù)抗原的表達(dá)情況預(yù)測病情的預(yù)后：如白血病患者有CD7與CD34共表達(dá)，預(yù)后不好。⑶疾病監(jiān)測：可監(jiān)測病程的發(fā)展，療效，可進行微小殘留白血病的檢測。二、免疫分型常用的免疫標(biāo)志及其意義HLA－DR、CD34陽性，有些研究表明

5、CD7與CD34共表達(dá)在AML且預(yù)后差。M1：流式上M1與M0相似不易區(qū)分，M1一般CD13＋、CD33＋、HLA－DR－，但CD34表達(dá)少于M0，可能表達(dá)部分CD15。M2：M0與M1的主要區(qū)別是成熟度增加，blasts減少，CD15較M1較顯著，CD34弱于M1，CD13有時表達(dá)強于CD33，多數(shù)病例HLA－DR（）。CD45－SSC圖顯示從髓系blast區(qū)至成熟骨髓細(xì)胞區(qū)的連續(xù)細(xì)胞帶，CD45－SSC圖有助于確定blasts比例。

6、M3、高顆粒性，具較高的SSC，但CD45較成熟C少，多數(shù)情況HLA－DR（）或表達(dá)減少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表達(dá)。M4與M5：兩型表型相似，但M4較M5表達(dá)更多的CD34（＋），較之M0、M1，M4與M5有更大的FSS和SSC，CD45－SSC圖上，成熟C出現(xiàn)在單核區(qū)，重要的表型為CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表達(dá)強于CD13，CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－

7、）很可能為M5，但只出現(xiàn)在少數(shù)病人中，部分M5可見CD56（＋）。M6：M6較少見且特征不明顯，一般HLA－DR，CD34、CD13、CD33陽性，CD45－SSC圖顯示主要為紅系成份。M7：巨核細(xì)胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和或CD41（GpⅡbⅢa）陽性，而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假陽性，可以用流式雙色分析在EDTA存在下，測GpⅡbⅢa與CD34以減少激活血小板的粘附。2ALL：ALL是兒

8、童中最常見的惡性腫瘤，約占全部腫瘤的25％，在成人，ALL約占急性白血病的25％，我們將ALL分為B祖細(xì)胞型，CD10＋或CD10－，前B細(xì)胞型，B細(xì)胞型，T細(xì)胞型。B祖細(xì)胞型ALL：在幼兒約占ALL的65％～70％，青少年為55％～60％，成人為50％。在兒童，約90％病例CD10＋，在幼兒只有少于50％病例CD10＋，blasts一般FSC、SSC很少，是FAB標(biāo)準(zhǔn)的L1或L2，一般TdT()HLADR()，CD19()，此型又分為