【周凌云】茶炭疽病的分子檢測及病原鑒定

1、1茶炭疽病的分子檢測及病原鑒定周凌云王沅江黃安平曾振劉紅艷（1湖南省茶葉研究所，長沙410125）摘要：要：根據(jù)茶炭疽病菌與其它菌ITS序列的差異設計了1對寡聚核苷酸引物，并優(yōu)化DNA抽提方法與擴增條件，從而實現(xiàn)了病葉準確而快速的PCR檢測。分離到兩種病原菌Z1、Z2通過形態(tài)鑒定與回接實驗初步鑒定為茶炭疽病菌，并在核酸體轉錄間隔區(qū)序列（GITS、ITS）及肌動蛋白基因（ACT）3對引物的多基因分子聯(lián)合檢測實驗中再次被證實。關鍵詞：關鍵詞

2、：茶炭疽病；分子檢測；病原；鑒定；癥狀MolecularDetectionPathogenIdentificationofTeaAnthraxZHOULingyunWANGYuanjiangHUANGAnpingZENGZhenLIUHongyanHunanTeaResearchInstitute，Changsha410125Abstract：Accdingtothesequenceofinternaltranscribedspacer

3、regions(ITS)oftheribosomalgene，apairofspecificprimersfthepathogenofTeaanthracnosewassynthesizedWiththeoptimizationofreactionconditionsamplificationStudyweprovidedaaccuraterapidmethodtodetectthepathogen.Z1、Z2wereisolatedb

4、eenpreliminaryidentifiedastwodifferentpathogensofteaanthracnosebymphologicalidentificationtiebackexperimentTheconclusionwastestifiedagainbymoleculardetectionofthreeprimes(GeneralITSITSActingenegene).Keywds:Teaanthracnose

5、；Moleculardetection；Pathogen；Identify；Symptom基金項目：湖南省農業(yè)科學院創(chuàng)新項目作者簡介：周凌云（1978—），女，湖南邵陽人，助理研究員，博士研究生，主要從事茶樹病害研究，zhoulingyun0808@3ACT512F：ATGTGCAAGGCCGGTTTCGC，783R：TACGAGTCCTTCTGGCCCAT分別應用TIANGEN公司植物基因組DNA抽提試劑盒與真菌基因組DNA試劑盒提取

6、自然發(fā)病葉片的DNA，而對于Z1、Z2的DNA抽提則采用其真菌基因組DNA試劑盒。以提取的DNA為模板，用3對引物擴增DNA序列，利用寶生物公司pMDTM19T載體進行PCR產物的克隆，方法參照pMDTM19T載體說明書。選擇插入片段長度與克隆片段長度一致的克隆，送交華大生物公司測序分析。將測定所得序列利用Blast程序從GenBank搜索相關序列，進行同源性比較。2結果與分析2.1明確兩種茶炭疽病癥茶炭疽病主要發(fā)生在茶樹成葉或老葉上，

7、病斑近圓形或不規(guī)則形，初期水漬狀暗綠色，最后呈紅褐色或灰白色，病斑上生有細小的黑色粒點，病斑可擴大到葉片的12以上，病健分明，見圖1A、1B。圖1A茶炭疽病紅褐色病斑圖1B茶炭疽病灰白色病斑22分離到兩種病原菌100塊紅褐色病樣分離到Z1的幾率為50.00%、Z2為5.12%，100塊灰白色病樣分離到Z1的幾率為73.33%、Z2為3.20%。Z1在PDA上生長速率平均為1.82cmd菌落顏色逐漸由白色轉變?yōu)榛野字敝粱液?。顯微鏡下菌絲體