草莓根腐病病原鑒定及分子檢測技術研究.pdf

1、近年來，根腐病成為制約我國草莓產業(yè)發(fā)展的重要因素。本論文針對草莓根腐病病原不清，檢測技術缺乏等問題，開展了草莓根腐病病原鑒定和分子檢測技術的研究。
　　 ⑴明確了北京地區(qū)草莓根腐病優(yōu)勢菌群為鐮刀菌(Fusarium spp.)和腐霉菌(Pythium spp.)。2011年4月到2012年3月，在北京周邊昌平、順義、廊坊等草莓種植基地通過田間病樣采集、病原菌分離，共得到105個菌株。經形態(tài)學觀察，初步認定為6個屬，它們是鐮刀菌屬

2、(Fusariumspp.)、腐霉菌屬(Pythium spp.)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)、疫霉屬(Phytophthora spp.)、擬盤多毛孢屬(Pestalotiopsis clavispora)、核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)。其中鐮刀菌屬和腐霉菌分別占分離總株數(shù)的64.76％和17.14％，出現(xiàn)頻率最高，為北京周邊地區(qū)草莓根腐病病原菌中的優(yōu)勢菌群。
　　 ⑵明確

3、引起北京周邊地區(qū)草莓根腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)和終極腐霉菌(Pythium ultimum)。用傷根接種法，對分離得到菌株進行致病性測定，結果發(fā)現(xiàn)，只有鐮刀菌屬和腐霉菌屬菌株在草莓植株上有不同程度的致病力。通過形態(tài)學鑒定結合真菌核糖體內轉錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer，ITS)序列的同源性比對，確定草莓根腐病病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum

4、)和終極腐霉菌(Pythium ultimum)。
　　 ⑶建立了尖孢鐮刀菌熒光定量PCR檢測體系。利用特異性引物FOF1/FOR1和草莓尖孢鐮刀菌菌株CM11032435，構建攜帶目的片段的重組標準品質粒-F，通過質粒梯度稀釋法建立標準曲線，經檢測體系優(yōu)化，應用于草莓根際土壤和植株中尖孢鐮刀菌的檢測，該體系靈敏度達到0.145fg/μL，人工模擬帶菌土的最小檢測值為0.37fg/μL，即10個孢子/g土壤能夠被檢測出來；人工接

5、種后對植株進行檢測發(fā)現(xiàn)，接種7-9天后，尖孢鐮刀菌菌在草莓植株體內累積量最多；田間土樣和植株的檢測發(fā)現(xiàn)，除了未發(fā)病田塊，其他土樣和植株病樣均被定量檢測到有效的病原菌量。
　　 ⑷建立了終極腐霉菌熒光定量PCR檢測體系。利用特異性引物ULT1F/ULT4R和草莓終極腐霉菌菌株CM11031012，構建攜帶目的片段的重組標準品質粒-Z，通過質粒梯度稀釋法建立標準曲線，經檢測體系優(yōu)化，應用于草莓根際土壤和植株中終極腐霉菌的檢測，該體系

6、靈敏度達到0.18fg/μL，人工模擬帶菌土壤的最低檢測數(shù)值為1.79fg/μL，可以檢測到100個孢子/g土壤；人工接種后對植株進行檢測發(fā)現(xiàn)，接種3-5d時，終極腐霉檢測量最大；田間土樣和植株檢測中，僅有重病田和死苗植株被檢測到發(fā)病閾值范圍內的病原菌量。
　　 ⑸明確了北京周邊地區(qū)引起草莓根腐病的病原菌主要類型，并首次應用熒光定量PCR技術快速定量檢測土壤和植株中的草莓根腐病病原菌，有助于明確病害的侵染來源，對病害的的田間病情