單細(xì)胞凝膠電泳對(duì)人類(lèi)肝癌細(xì)胞的研究

1、通過(guò)單細(xì)胞電泳觀察受重離子輻射的人體肝癌細(xì)胞的通過(guò)單細(xì)胞電泳觀察受重離子輻射的人體肝癌細(xì)胞的DNA損傷損傷摘要摘要目的：目的：現(xiàn)在很多國(guó)家都已經(jīng)發(fā)展了癌癥的重離子療法，特別是在GSI(GesellschaftfurSchwerionenfschungmbH，Darmstadt，Germany)已經(jīng)取得了引人注目的成果，但是由于重離子運(yùn)行方式的復(fù)雜性阻礙了實(shí)際運(yùn)用，因此基礎(chǔ)理論仍然需要更深的研究。在這篇文章中，我們將使用單細(xì)胞凝膠電泳來(lái)測(cè)

2、量重離子輻射對(duì)于SMMC7721細(xì)胞的基因毒性。X射線、γ射線、紫外線以及快中子輻射造成的DNA損傷資料已經(jīng)相當(dāng)完備，但是迄今為止關(guān)于重離子在這方面影響的研究很少。據(jù)此，我們嘗試通過(guò)彗星實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)重離子輻射對(duì)肝癌細(xì)胞的影響，同時(shí)建立一個(gè)臨床可用的重離子癌癥療法的數(shù)據(jù)庫(kù)。方法：方法：本次實(shí)驗(yàn)所選用的材料是人體肝癌細(xì)胞，在中國(guó)蘭州重離子加速器接受80MEVU的輻射，劑量分別為00.5，1248Gy，然后立即使用凝?1020Ne膠電泳檢測(cè)DN

3、A損傷，每個(gè)劑量的樣品選取100150個(gè)細(xì)胞，記下慧尾的長(zhǎng)度和數(shù)量，并用EXCLE分析數(shù)據(jù)。結(jié)果：結(jié)果：在受到0.5Gy到8Gy的輻射處理后，我們從彗星實(shí)驗(yàn)圖像發(fā)現(xiàn)SMMC7721細(xì)胞都受到損壞?；畚驳拈L(zhǎng)度和尾距都隨著劑量的增加而增加，而出現(xiàn)慧尾的細(xì)胞的數(shù)量也隨著劑量的增加而增多。當(dāng)劑量達(dá)到2Gy時(shí)，接近100%的細(xì)胞都受到損傷。此外，慧尾的長(zhǎng)度和距離都顯示出了線性關(guān)系。結(jié)論：結(jié)論：通過(guò)清晰的彗星實(shí)驗(yàn)圖像，我們的實(shí)驗(yàn)證明彗星實(shí)驗(yàn)可以用來(lái)

4、測(cè)量重離子對(duì)DNA的損傷。同時(shí)DNA損傷和重離子的劑量有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系，而且SMMC7721細(xì)胞對(duì)有很大的輻射敏感度。劑量改變而引起DNA的不同的?1020Ne反應(yīng)可以佐證彗星實(shí)驗(yàn)對(duì)重離子誘變引起的DNA損傷檢測(cè)也是有效的。引言引言在過(guò)去的幾十年里，從基礎(chǔ)的物理、化學(xué)到生物腫瘤和實(shí)驗(yàn)室放射療法開(kāi)始逐步發(fā)展，輻射研究已經(jīng)成為一個(gè)專(zhuān)門(mén)的分支學(xué)科。雖然關(guān)于X射線和γ射線的放射生物學(xué)影響已經(jīng)有了廣泛的研究，但是關(guān)于重離子束的放射生物學(xué)影響的研究

5、卻少之又少。隨著人類(lèi)足跡向外太空的邁進(jìn)，關(guān)于高線性能量轉(zhuǎn)移的研究吸引了越來(lái)越多的目光。隨著二十世紀(jì)七十年代中期LBL首次運(yùn)用重離子來(lái)治療癌癥，美國(guó)已經(jīng)得出了比傳統(tǒng)的軟組織瘤、骨癌、前列腺癌的放射療法更加有前途的結(jié)果?，F(xiàn)在許多國(guó)家的科學(xué)家都已經(jīng)設(shè)計(jì)出加速器來(lái)產(chǎn)生重離子束并用于臨床治療，并且已經(jīng)開(kāi)始進(jìn)行一些重離子癌癥療法的初步研究，比如，碳、氖、氧和氬。堿性狀態(tài)下的彗星實(shí)驗(yàn)是在奧斯汀和約翰遜的基礎(chǔ)上略作修改發(fā)展而來(lái)的，在進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)時(shí)，取1

6、0μl新鮮的細(xì)胞懸液于Dulbecc氏磷酸鹽緩沖液中（Ph為7.4），然后與30μl0.5%低熔點(diǎn)瓊脂混合，混合后平鋪于覆蓋有0.5%正常熔點(diǎn)瓊脂的載玻片上，然后再蓋上蓋玻片（目的是在室溫下干燥來(lái)防止灰塵和其他粒子的干擾）。待低熔點(diǎn)瓊脂在冰箱中凝固十分鐘之后，小心的取下蓋玻片并將載玻片慢慢的浸入到剛制備好的細(xì)胞裂解液中。從操作開(kāi)始到電泳的結(jié)束，所有的步驟都要避免陽(yáng)光的照射。裂解11.5個(gè)小時(shí)之后，將載玻片放置到電泳儀中，6個(gè)樣品的18個(gè)

7、載玻片隨機(jī)放置在電泳槽中。在電泳緩沖液中進(jìn)行2030分鐘的DNA解旋之后，然后在另一組緩沖液中進(jìn)行單細(xì)胞凝膠電泳。在電泳結(jié)束后，使用0.4mol的磷酸酯進(jìn)行中和化（pH=7.5）。DNADNA損傷評(píng)估損傷評(píng)估用溴化乙錠的水溶液對(duì)載玻片染色后，蓋上蓋玻片，使用放大倍速為1020倍的熒光顯微鏡觀察。同一個(gè)劑量的樣品數(shù)量為100150個(gè)細(xì)胞。記下慧尾的長(zhǎng)度以及含有慧尾的細(xì)胞的數(shù)量，與此同時(shí)，用135號(hào)黑白底片照相。最后，使用EXCEL對(duì)數(shù)據(jù)加