無機納米粒子進入肝癌細胞的過程及肝癌細胞的變化.pdf

1、本研究的目的是為了確認癌細胞質(zhì)內(nèi)的顆粒物質(zhì)是否為無機納米粒子，并探討無機納米粒子進入癌細胞的途徑、過程，及無機納米粒子和癌細胞的變化規(guī)律。 研究將Bel-7402肝癌細胞與HAP納米粒子共同孵育8小時后，電鏡觀察到癌細胞內(nèi)有與HAP納米粒子形貌相似的顆粒物質(zhì)；能譜和電子衍射圖檢測表明：細胞質(zhì)內(nèi)外的的顆粒物質(zhì)均為含鈣磷成分的物質(zhì)，且具有典型的HAP晶體結構特征。證實了HAP納米粒子進入到癌細胞內(nèi)。 實驗發(fā)現(xiàn)：與DMSO處理

2、后的肝癌細胞共同孵育后，大部分HAP納米粒子進入到細胞核。表明生理狀態(tài)下的核膜可阻擋納米粒子，自由擴散進入細胞的可能性較小。與細胞松弛素B處理過的癌細胞共同孵育后，僅有少量處理1小時的癌細胞內(nèi)有納米粒子，而處理12小時的癌細胞內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)納米顆粒。證明了HAP納米粒子被細胞吞噬進入的，吞噬的過程需要微絲參與。與尼莫地平處理過的肝癌細胞共同孵育，HAP納米粒子同樣進入癌細胞質(zhì)內(nèi)，主動運輸?shù)姆绞降目赡苄暂^小。與肝癌細胞分別孵育0.5小時到40

3、小時，均發(fā)現(xiàn)HAP納米粒子進入癌細胞的細胞質(zhì)內(nèi)。說明細胞吞噬納米粒子的速度很快。 經(jīng)過高溫高壓消毒后，無機納米晶體粒子的形貌和粒徑均無明顯影響。說明高溫高壓法是簡便易行的消毒方法。在生理環(huán)境中，無機納米粒子仍能保持分散的晶體粒子狀態(tài)，但其平均粒徑減少約50﹪。低速離心對其粒徑無明顯影響。因此，本研究中的無機納米粒子仍為分散的納米顆粒，不影響實驗結果。 進入癌細胞后，TiO2納米粒子逐漸被濃縮，團聚，但不能被細胞代謝分解，

4、因此不能作為理想的材料。而HAP納米粒子的尺寸變小，顆粒邊緣變模糊圓鈍，晶體的結晶度逐漸不完全，說明它被細胞降解。 與無機納米粒子共同孵育后，發(fā)現(xiàn)肝癌細胞發(fā)生納米粒子周圍細胞質(zhì)的溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度腫脹，線粒體腫脹崩解、嵴結構紊亂，核膜周間隙擴大、核固縮等現(xiàn)象，及細胞核凝聚成團，并有凋亡小體。用TUNEL法證實凋亡的陽性信號明顯增多。將與HAP納米粒子作用的肝癌細胞的DNA電泳呈明顯梯帶狀分布，具有細胞凋亡的特征。說明與HAP納米粒