無(wú)機(jī)納米粒子進(jìn)入肝癌細(xì)胞的過(guò)程及肝癌細(xì)胞的變化.pdf

1、本研究的目的是為了確認(rèn)癌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的顆粒物質(zhì)是否為無(wú)機(jī)納米粒子，并探討無(wú)機(jī)納米粒子進(jìn)入癌細(xì)胞的途徑、過(guò)程，及無(wú)機(jī)納米粒子和癌細(xì)胞的變化規(guī)律。 研究將Bel-7402肝癌細(xì)胞與HAP納米粒子共同孵育8小時(shí)后，電鏡觀察到癌細(xì)胞內(nèi)有與HAP納米粒子形貌相似的顆粒物質(zhì)；能譜和電子衍射圖檢測(cè)表明：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)外的的顆粒物質(zhì)均為含鈣磷成分的物質(zhì)，且具有典型的HAP晶體結(jié)構(gòu)特征。證實(shí)了HAP納米粒子進(jìn)入到癌細(xì)胞內(nèi)。 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：與DMSO處理

2、后的肝癌細(xì)胞共同孵育后，大部分HAP納米粒子進(jìn)入到細(xì)胞核。表明生理狀態(tài)下的核膜可阻擋納米粒子，自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞的可能性較小。與細(xì)胞松弛素B處理過(guò)的癌細(xì)胞共同孵育后，僅有少量處理1小時(shí)的癌細(xì)胞內(nèi)有納米粒子，而處理12小時(shí)的癌細(xì)胞內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)納米顆粒。證明了HAP納米粒子被細(xì)胞吞噬進(jìn)入的，吞噬的過(guò)程需要微絲參與。與尼莫地平處理過(guò)的肝癌細(xì)胞共同孵育，HAP納米粒子同樣進(jìn)入癌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，主動(dòng)運(yùn)輸?shù)姆绞降目赡苄暂^小。與肝癌細(xì)胞分別孵育0.5小時(shí)到40

3、小時(shí)，均發(fā)現(xiàn)HAP納米粒子進(jìn)入癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。說(shuō)明細(xì)胞吞噬納米粒子的速度很快。 經(jīng)過(guò)高溫高壓消毒后，無(wú)機(jī)納米晶體粒子的形貌和粒徑均無(wú)明顯影響。說(shuō)明高溫高壓法是簡(jiǎn)便易行的消毒方法。在生理環(huán)境中，無(wú)機(jī)納米粒子仍能保持分散的晶體粒子狀態(tài)，但其平均粒徑減少約50﹪。低速離心對(duì)其粒徑無(wú)明顯影響。因此，本研究中的無(wú)機(jī)納米粒子仍為分散的納米顆粒，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 進(jìn)入癌細(xì)胞后，TiO2納米粒子逐漸被濃縮，團(tuán)聚，但不能被細(xì)胞代謝分解，

4、因此不能作為理想的材料。而HAP納米粒子的尺寸變小，顆粒邊緣變模糊圓鈍，晶體的結(jié)晶度逐漸不完全，說(shuō)明它被細(xì)胞降解。 與無(wú)機(jī)納米粒子共同孵育后，發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞發(fā)生納米粒子周圍細(xì)胞質(zhì)的溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過(guò)度腫脹，線粒體腫脹崩解、嵴結(jié)構(gòu)紊亂，核膜周間隙擴(kuò)大、核固縮等現(xiàn)象，及細(xì)胞核凝聚成團(tuán)，并有凋亡小體。用TUNEL法證實(shí)凋亡的陽(yáng)性信號(hào)明顯增多。將與HAP納米粒子作用的肝癌細(xì)胞的DNA電泳呈明顯梯帶狀分布，具有細(xì)胞凋亡的特征。說(shuō)明與HAP納米粒