骨髓和羊膜來源的flk139;cd3139;cd3439;胚胎后亞全能干細胞生物學特性的研究

1、中國協和醫(yī)科大學博士學位論文骨髓和羊膜來源的Flk1CD31CD34胚胎后亞全能干細胞生物學特性的研究姓名：史明霞申請學位級別：博士專業(yè)：內科學指導教師：趙春華20060501! 魚堡塑墾型盔堂主里墨蘭型堂墮! 蔓主塹塞生蘭堡堡苧 一這提示F l k l + C D 3 l ℃D 3 4 - 干細胞可能作為組織工程中的種子細胞，參與機體內多種組織的損傷修復。進一步研究干細胞移植入體內后的生長、遷移和分化功能，將為干細胞早日應用于人類疾病

2、提供基礎。本研究的第一部分旨在研究胎兒骨髓源F l k l + c D 3 l ℃D 3 4 ’干細胞向骨髓歸巢的機制，并探索提高其歸巢及長期植入效率的方法。通過運用C D 4 5 、G l y A 及C D 3 4免疫磁珠分選和極限稀釋法，從胎兒骨髓中分離得到F l k l + C D 3 1 ．C D 3 4 ‘干細胞亞群，分析細胞中C X C R 4 的表達。結果發(fā)現，盡管在細胞表砸?guī)缀鯔z測不到C X C R 4 ，但大部分的F

3、l k l + C D 3 1 - c D 3 4 ‘干細胞( 8 7 ．4 ％．9 7 ．8 ％) 的胞漿中都有c x c R 4 表達，而且這些胞內的c x C R 4 在適當細胞因子刺激下，能夠在短時間內被誘導到細胞表面表達。通過細胞因子刺激( 2 4 小時) ，不僅能夠上調細胞表面及內部的c x c R 4 ，而且可以增加細胞在體外沿基質細胞衍生生長因子．1 ( s 叻m a l c e l l - d c r i v e df

4、 a c t 0 卜1 ，s D F ．1 ) 濃度梯度遷移的活性，和移植入經亞致死量照射的N O D ，s c I D 小鼠體內后向骨髓的歸巢以及長期的存活和植入，同時也加快了受體小鼠的造血恢復。而用c x c R 4 的中和抗體處理F 1 k 1 + C D 3 1 ℃D 3 4 ’干細胞，則明顯降低其遷移的能力和移植后在受體小鼠中的歸巢和植入。以上結果提示，s D F 一1 及其受體C x c R 4 在F u 【1 + c D

5、3 1 ．C D 3 4 ‘干細胞遷移和歸巢中發(fā)揮著重要的作用；增加細胞表面C X C R 4的表達，有助于促進F l k l + c D 3 l - C D 3 4 。干細胞向骨髓歸巢和加快受體造血恢復。在第二部分，我們研究了骨髓源F l k l + C D 3 1 _ C D 3 4 ‘干細胞能否作為組織工程種子細胞，參與肝臟的損傷修復，初步探討了運用骨髓源F l k l + C D 3 l ℃D 3 4 ‘干細胞治療肝纖維化的可能

6、性及可行性。采用c c l 4 導致的小鼠肝纖維化模型，在損傷后立即或1 周后經尾靜脈注射F l k l + C D 3 1 ．C D 3 4 。干細胞，2 或5 周后檢測受體小鼠肝臟的纖維化程度和供體細胞的植入。結果發(fā)現，C c l 4 損傷后立即注射F m l + C D 3 1 - C D 3 4 ‘干細胞，可以使肝臟損傷程度明顯減輕，減少膠原沉積，使肝臟羥脯氨酸含量及血清纖維化指標顯著下降；而損傷1 周后注射細胞則無明顯變化。免