依賴輸血的β地貧患兒pra干擾臍血cd3439;細胞增殖分化的研究

1、中山大學碩士學位論文依賴輸血的β地貧患兒PRA干擾臍血CD34細胞增殖分化的研究姓名：楊興鴿申請學位級別：碩士專業(yè)：兒科學指導教師：方建培20070526筮夔絢魚曲E 絲蘊星氈￡壁△王迭監(jiān)墮￡Q 塑：紲照增墮盆他的鯉紅 擅噩移植腎丟失的主要原因：這也可能足引起B(yǎng) 地貧患者H S C T 低植入率的原因。本研究擬在體外將臍血C D 3 4 + 細胞與實驗血清孵育( 地貧患者P R A 陽性血清、地貧患者P R A 陰性的對照血清) ，通過

2、測定乳酸脫氫酶水平、流式細胞儀檢測C D 3 4 +細胞凋亡及壞步E 情況；通過體外臍血C D 3 4 + 細胞半固體集落培養(yǎng)及3 H 摻入法測定細胞的增殖能力，探討P R A 對臍血C D 3 4 + 細胞增殖分化的影響，為分析地貧患者U C B T 低植入率的可能機制提供實驗依據(jù)。材料和方法1 ．標本來源臍血( C B ) ：本院健康足月妊娠分娩之胎兒臍靜脈血，用含枸櫞酸鈉的一次性采血袋收集，采血量為8 0 ～1 0 0 m l ，

3、共七份。實驗血清：在我科確診為B 地中海貧血且依賴輸血( 輸血次數(shù)／> 3 ) 的患兒，每人抽取全血5 m l 至無菌干燥管中，離心后分離血清，一2 0 ℃冰箱保存待檢測。共收集七份P R A 陽性血清和七份P R A 陰性血清。2 ．實驗方法2 ．1 P R A 檢測：收集血清標本后，采用美國O n eL a m b d a 公司提供的萊姆德混合抗原板( L A T M ) 和萊姆德抗原板( L A T ) 檢測P R A ，檢

4、測方法：依據(jù)E L I S A 原理，采用不同的H L A 抗原包被泰薩奇( T e r a s a k i ) 板，以特異性檢測抗H L Al g G 抗體。P R A > 1 0 ％為陽性。2 ．2 臍血的H L A從采集到的臍血標本中取出2 m l 送H L A 抗原分型檢測，僅檢測H L A ．I 類抗原中的A 位點和B 位點，采用一步法單克隆抗體技術(shù)。具體步驟參考文獻。由專人檢測并報結(jié)果。2 ．3 單個核細胞的分離采用F