骨髓增生異常綜合征患者來源的成骨細胞生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：研究MDS來源的成骨細胞的生物學(xué)特性及其體外造血支持能力，探討成骨細胞在MDS發(fā)病中的作用 方法： (1)第一部分采用酶聯(lián)免疫夾心(ELISA)法檢測12例MDS患者骨髓上清液中SDF-1a水平，探討MDS骨髓微環(huán)境是否存在異常。 (2)第二部分以人成骨細胞系hFOB1.19為對象，研究成骨細胞的生物學(xué)特性，初步探討成骨細胞在造血調(diào)控中的作用。應(yīng)用流式細胞術(shù)(Flow cytometry，F(xiàn)CM)分析人成骨

2、細胞系hFOB1.19的免疫表型， RT-PCR檢測生長因子的表達情況。 (3)第三部分研究MDS來源的成骨細胞的生物學(xué)特性，探討成骨細胞在MDS發(fā)病中的作用。采集MDS患者和正常供者骨髓標本，分離、培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cell，MSC)，進行細胞形態(tài)學(xué)觀察、免疫表型及成纖維細胞集落(CFU-F)形成分析。取第3代MSC體外誘導(dǎo)為成骨細胞，絲裂霉素C處理后做為滋養(yǎng)層細胞。在無外源性細胞因子的條件下

3、，將經(jīng)Ficoll分離獲取的正常供者來源的單個核細胞(MNC)接種到成骨細胞上共培養(yǎng)，研究成骨細胞體外支持造血祖細胞生存的作用；應(yīng)用RT-PCR在mRNA水平上分析由骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化的成骨細胞生長因子的表達情況。 結(jié)果： (1)第一部分MDS難治性貧血伴有原始細胞增多(RAEB)組患者骨髓上清液中SDF-1a水平明顯低于難治性貧血(RA)+環(huán)形鐵粒幼細胞性難治性貧血(RAS)組及對照組(均P<0.05)。MDS患

4、者骨髓上清液中SDF-1a水平和MDS患者骨髓原始細胞比例成負相關(guān)(r=-0.585，P=0.046)，和其國際預(yù)后評分系統(tǒng)(IPSS)積分成負相關(guān)(r=-0.657，P=0.02)，但和外周血中的白細胞計數(shù)、血小板數(shù)量及血紅蛋白濃度均無明顯相關(guān)性(均P>0.05)。 (2)第二部分FCM顯示，hFOB1.19表達CD44、CD73(SH3)、CD105(SH2)及CD90(Thy1)，而不表達CD34、CD45、HLA-DR等

5、造血細胞標記；RT-PCR顯示hFOB1.19表達Oct-4、Rex-1等胚胎干細胞標志但不表達hTERT，并經(jīng)證實具有多向分化的潛能，此外hFOB1.19還能表達SCF，IL-6，IL-11，SDF-1，GM-CSF和G-CSF等多種生長因子。 (3)第三部分MDS患者MSC在體外呈典型的成纖維樣細胞形態(tài)，細胞形態(tài)和生長模式與正常供者來源的MSCs無明顯差異。MDS患者和正常供者骨髓細胞的成纖維集落形成能力(CFU-F)也沒有

6、差異(P>0.05)。和MNC共培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)MDS患者來源的成骨細胞在無外源性細胞因子的情況下仍能夠短期(3周)維持GM-CFC造血祖細胞的存活。MDS成骨細胞組培養(yǎng)上清中的細胞形成的CFU-GM集落數(shù)與對照組比較無明顯差異(P>0.05)。RT-PCR發(fā)現(xiàn)，正常供者來源的MSC表達SCF，IL-6，IL-11，SDF-1等生長因子mRNA，當(dāng)誘導(dǎo)分化為成骨細胞時開始表達G-CSF mRNA，但始終未見GM-CSF表達。MDS患者來源的

7、MSCs也能表達上述生長因子的mRNA，當(dāng)誘導(dǎo)分化為成骨細胞后開始表達G-CSF mRNA，同樣未見GM-CSF表達。 結(jié)論： (1)MDS患者SDF-1/CXCR4系統(tǒng)存在異常，檢測SDF-1a水平可能有助于MDS的診斷、判斷其預(yù)后，并為治療MDS提供新思路。 (2)人成骨細胞系hFOB1.19可能是處于較早階段的成骨祖細胞，表達多種造血相關(guān)的生長因子，成骨細胞可能對骨髓正常造血具有重要的調(diào)控作用。 (