EcN肝素前體多糖的合成調(diào)控研究.pdf

1、肝素是一種使用廣泛的臨床抗凝血藥物，由于“肝素鈉污染事件”，人們對(duì)動(dòng)物源性肝素的安全性表示擔(dān)憂?；瘜W(xué)酶法合成型肝素為肝素提供了另一種來源，以肝素前體為初始碳骨架，通過多種酶的作用合成出有活性的肝素。肝素前體是益生大腸桿菌Nissle1917(EcN)胞外莢膜多糖的成分，可以抑制致病菌對(duì)腸道的粘附，調(diào)節(jié)腸道微生物的組成。EcN利用莢膜多糖在腸道中定植，通過多種調(diào)節(jié)系統(tǒng)與食源性腸道致病菌競(jìng)爭(zhēng)來治療腸道疾病。最近研究表明碳源會(huì)影響肝素前體合成

2、的產(chǎn)量，然而碳源控制肝素前體合成的機(jī)制尚不明確。本論文通過啟動(dòng)子表達(dá)分析、凝膠緩滯實(shí)驗(yàn)(EMSA)、核磁共振(NMR)分析等技術(shù)手段，研究肝素前體合成受碳源調(diào)控的機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)肝素前體的生物合成受葡萄糖抑制，而添加果糖或甘露糖為碳源會(huì)增加肝素前體的產(chǎn)量。通過基因水平研究，確定了環(huán)腺苷酸-環(huán)腺苷酸受體蛋白（cAMP-CRP）復(fù)合物結(jié)合在肝素前體基因簇region3啟動(dòng)子的CRP結(jié)合位點(diǎn)上，并激活肝素前體基因簇的轉(zhuǎn)錄，突變CRP結(jié)合位點(diǎn)后啟