蟲草多糖對單側(cè)輸尿管梗阻小鼠腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響及機制探討.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化是各種腎臟疾病進展到終末期腎病的共同途徑和主要病理基礎，rIF程度與腎臟疾病預后密切相關，TIF程度越重，腎臟疾病預后越差。近年發(fā)現(xiàn)在慢性腎臟疾病的進展中，腎小管上皮細胞不僅是被動的受害者，而且是主動的參與者，越來越多研究提示EMT是。rIF形成的重要環(huán)節(jié)。抑制甚至逆轉(zhuǎn)EMT‘可能會給TIF的治療帶來革命性的突破。蟲草多糖是傳統(tǒng)中藥冬蟲夏草的主要成分，可以調(diào)節(jié)免疫功能、降低血糖、抗腫瘤、保護’腎臟。多年臨床經(jīng)驗表明，慢

2、性腎臟病患者長期服用冬蟲夏草可降低蛋白尿、延緩慢性。腎病進展。但是其具體作用機制至今尚未完全明確。近年研究顯示，蟲草對組織纖維化尤其對肝臟纖維化有明顯的抑制作用。目前，關于蟲草多糖對‘腎臟纖維化的研究少見報道，本研究主要目的是觀察蟲草多糖對UUO小鼠腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，并探討其可能的相關機制。 方法：選用雄性CD-1小鼠，我們采用經(jīng)典的單側(cè)輸尿管梗阻模型。實驗分組：1)對照組(N=8)；2)手術(shù)組(N=10)；3)蟲草多

3、糖治療組(N=10)。給予小鼠標準飼料自由進食及飲水，每天記錄體重。手術(shù)組和治療組小鼠均打開腹腔，分離左側(cè)輸尿管，雙線結(jié)扎后離斷。對照組小鼠只打開腹腔但不結(jié)扎輸尿管。治療組在術(shù)前2天開始給予蟲草多糖溶于蒸餾水，160 mg/kg灌胃。術(shù)后7天處死小鼠。小鼠取腹腔動脈血，取左側(cè)部分腎組織于10﹪中性福爾馬林固定，石蠟包埋；其余腎組織于液氮冷凍，-80℃保存。測定小鼠的血肌酐值。光鏡下觀察各組小鼠腎臟間質(zhì)纖維化程度。免疫組化觀察各組腎臟α-

4、SMA、E-cadherin、CTGF、ILK、的表達分布變化。用Western blot方法定量檢測各組腎臟ILK和CTGF蛋白表達量變化。用real time PCR技術(shù)觀察各組腎臟α-SMA、E-cadherin、CTGF、ILK mRNA水平的變化。 結(jié)果：手術(shù)7天后，各組小鼠血肌酐無顯著差異，但手術(shù)組小鼠患側(cè)腎臟比對側(cè)體積增大，顏色蒼白，提示UUO模型建立成功。研究發(fā)現(xiàn)，手術(shù)組小鼠間質(zhì)纖維化程度較對照組加重(19.39

5、±1.52﹪vs．2.00±0.34﹪，P<0.01)，而蟲草多糖可以顯著減輕腎間質(zhì)纖維化(11.25±1.07﹪vs．19.39±1.52﹪，P<0.01)。免疫組化結(jié)果顯示，手術(shù)組小鼠’腎小管上皮E-cadherin蛋白表達較對照組顯著減少，而腎小管及間質(zhì)區(qū)α-SMA蛋白的表達比對照組顯著增加(P均<0.01)。治療組小鼠腎小管上皮E-cadherrin表達比手術(shù)組明顯增多，但仍明顯低于對照組(P均<0.01)。治療組α-SMA蛋白

6、的表達較手術(shù)組顯著降低，但高于對照組(P均<0.01)。Real time PCR的結(jié)果顯示，手術(shù)組小鼠α-SMA mRNA的表達較對照組顯著增多，治療組小鼠α-SMA mRNA的表達比手術(shù)組明顯減少(P均<0.01)。手術(shù)組小鼠E-cadherin mRNA的表達較對照組顯著降低，而治療組E-cadherin mRNA的表達較手術(shù)組明顯增多(P均<0.01)。研究中我們發(fā)現(xiàn)，對照組小鼠腎小管僅有少量CTGF、ILK表達分布，而手術(shù)組小

7、鼠腎小管CTGF及ILK蛋白及mRNA的表達顯著升高。蟲草多糖治療后，小鼠腎小管CTGF、ILK蛋白及mRNA的表達都明顯低于手術(shù)組(P均<0.01)。 結(jié)論： 1、 UUO小鼠早期腎小管上皮細胞E-cadherin表達減少，α-SMA表達增多，提示。腎小管上皮細胞發(fā)生了EMT。 2、UUO小鼠CTGF、ILK的表達增多，可能介導了EMT的形成。 3、蟲草多糖可顯著抑制CTGF、ILK的表達，并抑制E-c