兩株耐堿放線菌的次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、嗜堿菌是極端微生物中的一類,長期應(yīng)對惡劣的生存環(huán)境,其必定會(huì)擁有獨(dú)特的生理功能和代謝途徑,產(chǎn)生普通微生物所不能產(chǎn)生的活性物質(zhì)。但是目前對嗜堿菌和耐堿菌次生代謝產(chǎn)物的研究卻鮮有報(bào)道。為了尋找結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物,本論文采用化學(xué)和活性相結(jié)合的集成篩選法,開展了對耐堿放線菌次生代謝產(chǎn)物的研究工作。內(nèi)容包括:海洋放線菌和真菌的分離,耐堿放線菌的篩選及初步評(píng)價(jià),天才菌株的獲得及堿調(diào)節(jié)對其次生代謝產(chǎn)物的影響,活性成分的分離純化,單體化合物的結(jié)構(gòu)解析

2、,單體化合物活性的初步評(píng)價(jià)。
　　從青島泥樣和海南植物樣品中分離得到了42株微生物。采用SRB和MTT法,以小鼠白血病細(xì)胞P388、宮頸癌細(xì)胞Hela、人白血病細(xì)胞HL-60為篩選模型對分離得到的菌株和沙漠菌株進(jìn)行細(xì)胞毒活性的篩選,然后用平板打孔法,進(jìn)行抑菌活性的篩選,再結(jié)合HPLC指紋圖譜及薄層色譜進(jìn)行化學(xué)篩選,得到2株“天才菌株”-YIM80379和MBRL-204,并對其進(jìn)行深入研究。YIM80379進(jìn)鑒定為擬諾卡氏菌Noc

3、ardiopisis alkaliphila sp.nov.,MBRL-204為鏈霉菌Streptomyces sindenensis。
　　在考察了不同條件堿脅迫對這兩株菌的次生代謝的影響后,對其分別進(jìn)行了大規(guī)模發(fā)酵,對發(fā)酵產(chǎn)物運(yùn)用了萃取,薄層層析,正相、反相硅膠柱層析,LH-20凝膠柱層析,反相高壓液相等多種化學(xué)的分離純化手段,從Nocardiopisisalkaliphila sp.nov.YIM80379的次生代謝產(chǎn)物中分

4、離得到6個(gè)單體化合物(1-6),從Streptomyces sindenensis MBRL-204的次生代謝產(chǎn)物中分離得到17個(gè)單體化合物(7-23)。繼而,利用理化性質(zhì)和波譜學(xué)方法(IR,UV,MS,NMR等)結(jié)合化學(xué)反應(yīng)闡述了23個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)(化合物結(jié)構(gòu)及名稱參見Table1),其中新化合物3個(gè)。所得化合物的結(jié)構(gòu)類型包括:2-吡喃酮類(1,2)、吩嗪類(7,8)、二酮哌嗪類(17-21)、喹啉酮類(9-16)、其他類(3-6

5、,22,23)。
　　利用SRB法、MTT法對化合物進(jìn)行了細(xì)胞毒活性測試,化合物7和8對A549細(xì)胞有中等程度抑制活性。用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法對部分單體化合物的抗菌活性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià),結(jié)果表明:化合物1、2、7-16和23分別對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、銅綠假單孢菌、產(chǎn)氣桿菌以及白色念珠菌表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。
　　綜上,本文對兩株耐堿放線菌的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行了系統(tǒng)研究,共分離鑒定了23個(gè)化合物,包括新2-吡