海洋來源放線菌次級代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、放線菌是產(chǎn)生天然生物活性物質(zhì)的重要微生物資源，其開發(fā)利用一直備受各國重視。迄今所發(fā)現(xiàn)的20，000余種微生物來源的生物活性物質(zhì)中，約有50％是由放線菌產(chǎn)生的。因此，放線菌資源的開拓以及采用新方法對放線菌資源的深入挖掘一直是放線菌代謝產(chǎn)物研究的重要內(nèi)容。本論文對海綿及紅樹林來源的放線菌進(jìn)行分離篩選，并對3株放線菌進(jìn)行了次級代謝產(chǎn)物研究；同時對一株采用基因篩選技術(shù)篩選到的含鹵代酶基因的放線菌進(jìn)行了發(fā)酵條件的探索，以期獲得含鹵化合物。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2、包括：放線菌的分離和純化；菌株的化學(xué)及活性篩選；目標(biāo)菌株發(fā)酵條件的考察；目標(biāo)菌株發(fā)酵；單體化合物的分離純化、結(jié)構(gòu)解析以及初步的活性評價(jià)。
　　 本研究從南海海綿樣品分離純化到放線菌52株，從紅樹林土壤中分離到122株放線菌。對其進(jìn)行抗腫瘤活性的初篩和復(fù)篩，共篩選出具有細(xì)胞增殖抑制活性的菌株45株。通過對這45株活性菌株進(jìn)行液相指紋圖譜分析，選取了3株目標(biāo)菌株作為代謝產(chǎn)物研究的目標(biāo)菌株。這三株放線菌高效液相指紋圖譜的共同特質(zhì)是：代

3、謝產(chǎn)物豐富、HPLC顯示具有系列吸收并且具有抗腫瘤活性。通過對這3株放線菌在多種培養(yǎng)條件下的薄層色譜、液相指紋圖譜、活性篩選結(jié)果、代謝產(chǎn)物浸膏的產(chǎn)量分析，確定了各個目標(biāo)菌株的最佳發(fā)酵條件。通過多種分離純化手段的聯(lián)合應(yīng)用，從菌株GW31-48發(fā)酵產(chǎn)物乙酸乙酯提取物中分離到12個單體化合物，包括5個cycloheximide類化合物(1-5)，4個環(huán)二肽類化合物(6-9)，1個吲哚生物堿類化合物(10)，2個苯的衍生物(11-12)。其中化

4、合物1-2為新化合物。從菌株AH17-3中分離到4個聚酮類化合物(13-16)。從菌株AH7-2的發(fā)酵產(chǎn)物乙酸乙酯提取物中分離得到4個化合物，包括1個聚酮類化合物(17)，2個噻唑類化合物(18，19)，其余化合物的結(jié)構(gòu)正在確定中。化合物的活性評價(jià)也在進(jìn)行中?；蚝Y選是近年來在分子生物學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新的篩選技術(shù)，是對傳統(tǒng)活性篩選和化學(xué)篩選的有益補(bǔ)充。如何對基因篩選陽性菌株進(jìn)行代謝產(chǎn)物研究，是目前面臨的一個重要問題，本論文對此開展了部

5、分探索性研究。對一株海洋來源的鹵代酶基因篩選呈陽性的小單孢菌進(jìn)行了系統(tǒng)的發(fā)酵條件探索，以期能激活鹵代酶基因，獲得含鹵素的化合物，但發(fā)酵浸膏中未能獲得鹵代產(chǎn)物。綜上所述，本文從3株放線菌中共分離得到20個單體化合物，確定了其中19個化合物的結(jié)構(gòu)，包括2個新化合物。這些成果為海洋放線菌代謝產(chǎn)物研究提供了新結(jié)構(gòu)，為開發(fā)海洋放線菌資源奠定了基礎(chǔ)。同時，本論文對利用基因篩選技術(shù)發(fā)掘放線菌次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究，采用化學(xué)及活性篩選并輔助分子探針基因