海洋來(lái)源放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、放線菌是產(chǎn)生天然生物活性物質(zhì)的重要微生物資源，其開(kāi)發(fā)利用一直備受各國(guó)重視。迄今所發(fā)現(xiàn)的20，000余種微生物來(lái)源的生物活性物質(zhì)中，約有50％是由放線菌產(chǎn)生的。因此，放線菌資源的開(kāi)拓以及采用新方法對(duì)放線菌資源的深入挖掘一直是放線菌代謝產(chǎn)物研究的重要內(nèi)容。本論文對(duì)海綿及紅樹(shù)林來(lái)源的放線菌進(jìn)行分離篩選，并對(duì)3株放線菌進(jìn)行了次級(jí)代謝產(chǎn)物研究；同時(shí)對(duì)一株采用基因篩選技術(shù)篩選到的含鹵代酶基因的放線菌進(jìn)行了發(fā)酵條件的探索，以期獲得含鹵化合物。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

2、包括：放線菌的分離和純化；菌株的化學(xué)及活性篩選；目標(biāo)菌株發(fā)酵條件的考察；目標(biāo)菌株發(fā)酵；單體化合物的分離純化、結(jié)構(gòu)解析以及初步的活性評(píng)價(jià)。
　　 本研究從南海海綿樣品分離純化到放線菌52株，從紅樹(shù)林土壤中分離到122株放線菌。對(duì)其進(jìn)行抗腫瘤活性的初篩和復(fù)篩，共篩選出具有細(xì)胞增殖抑制活性的菌株45株。通過(guò)對(duì)這45株活性菌株進(jìn)行液相指紋圖譜分析，選取了3株目標(biāo)菌株作為代謝產(chǎn)物研究的目標(biāo)菌株。這三株放線菌高效液相指紋圖譜的共同特質(zhì)是：代

3、謝產(chǎn)物豐富、HPLC顯示具有系列吸收并且具有抗腫瘤活性。通過(guò)對(duì)這3株放線菌在多種培養(yǎng)條件下的薄層色譜、液相指紋圖譜、活性篩選結(jié)果、代謝產(chǎn)物浸膏的產(chǎn)量分析，確定了各個(gè)目標(biāo)菌株的最佳發(fā)酵條件。通過(guò)多種分離純化手段的聯(lián)合應(yīng)用，從菌株GW31-48發(fā)酵產(chǎn)物乙酸乙酯提取物中分離到12個(gè)單體化合物，包括5個(gè)cycloheximide類化合物(1-5)，4個(gè)環(huán)二肽類化合物(6-9)，1個(gè)吲哚生物堿類化合物(10)，2個(gè)苯的衍生物(11-12)。其中化

4、合物1-2為新化合物。從菌株AH17-3中分離到4個(gè)聚酮類化合物(13-16)。從菌株AH7-2的發(fā)酵產(chǎn)物乙酸乙酯提取物中分離得到4個(gè)化合物，包括1個(gè)聚酮類化合物(17)，2個(gè)噻唑類化合物(18，19)，其余化合物的結(jié)構(gòu)正在確定中。化合物的活性評(píng)價(jià)也在進(jìn)行中?；蚝Y選是近年來(lái)在分子生物學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新的篩選技術(shù)，是對(duì)傳統(tǒng)活性篩選和化學(xué)篩選的有益補(bǔ)充。如何對(duì)基因篩選陽(yáng)性菌株進(jìn)行代謝產(chǎn)物研究，是目前面臨的一個(gè)重要問(wèn)題，本論文對(duì)此開(kāi)展了部

5、分探索性研究。對(duì)一株海洋來(lái)源的鹵代酶基因篩選呈陽(yáng)性的小單孢菌進(jìn)行了系統(tǒng)的發(fā)酵條件探索，以期能激活鹵代酶基因，獲得含鹵素的化合物，但發(fā)酵浸膏中未能獲得鹵代產(chǎn)物。綜上所述，本文從3株放線菌中共分離得到20個(gè)單體化合物，確定了其中19個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，包括2個(gè)新化合物。這些成果為海洋放線菌代謝產(chǎn)物研究提供了新結(jié)構(gòu)，為開(kāi)發(fā)海洋放線菌資源奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)，本論文對(duì)利用基因篩選技術(shù)發(fā)掘放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究，采用化學(xué)及活性篩選并輔助分子探針基因