從NMDA受體途徑探討HCN通道抑制劑ZD7288對腦缺血的保護作用.pdf

1、目的：運用大腦中動脈線栓法建立大鼠缺血2h再灌注22h腦缺血損傷模型，從NMDA受體途徑探討超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子(HCN)通道抑制劑ZD7288對腦缺血的神經(jīng)保護作用。
　　方法：
　　(1)缺血前2h經(jīng)側(cè)腦室給予不同劑量的ZD7288，分別為5μg、10μg、15μg、20μg、25μg，缺血2h再灌注22h后，進行行為學評分和TTC染色腦梗死體積計算，以確定ZD7288對腦缺血神經(jīng)保護作用的最佳有效劑量；

2、　　(2)不同時間點經(jīng)側(cè)腦室給予最佳有效劑量的ZD7288，缺血2h再灌注22h后，通過行為學評分和TTC染色腦梗死體積計算來確定ZD7288對腦缺血保護的時間窗；
　　(3)運用免疫印跡法檢測HCN1及HCN2在缺血大鼠皮層、海馬的表達情況；
　　(4)運用免疫組織化學方法檢測NMDAR1、p-NMDAR1、NMDAR2A、p-NMDAR2A、NMDAR2B、p-NMDAR2B、NMDAR3A、NMDAR3B在缺血大鼠皮層

3、、海馬中的表達情況。
　　結(jié)果：
　　(1)5μg和10μg ZD7288組對缺血2h再灌注22h腦損傷無明顯保護效應，15μg和20μg具有神經(jīng)保護效應（P﹤0.05），25μg效果最為顯著。
　　(2)缺血16h為ZD788腦缺血保護的時間窗，缺血前2h預防性給藥的治療效果最為明顯。
　　(3)免疫印跡結(jié)果顯示：HCN1、HCN2在皮層、海馬模型組的表達較假手術(shù)組均有上調(diào)，ZD7288可逆轉(zhuǎn)以上變化。

4、　　(4)免疫組化結(jié)果顯示：a. HCN1主要表達于胞膜，與假手術(shù)組比較，HCN1在模型組的皮層、海馬CA1及DG區(qū)表達增強，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)象；模型組及ZD7288組在CA3區(qū)均無明顯變化。 b. HCN2主要表達于胞膜，與假手術(shù)組比較，HCN2在模型組的皮層、海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)及DG區(qū)表達增強，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)象。 c. NR1主要表達于神經(jīng)纖維突起，與假手術(shù)組比較，NR1在模型組海馬CA1區(qū)表達減弱，在

5、皮層、海馬CA3區(qū)、DG區(qū)增強，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)象。p-NR1主要表達于胞膜，與假手術(shù)組比較，p-NR1在模型組皮層、海馬CA1區(qū)表達增強，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)象；模型組及ZD7288組在海馬CA3及DG區(qū)的表達均無明顯變化。d. NR2A表達于胞膜上，海馬DG區(qū)無表達，與假手術(shù)組比較，NR2A在模型組海馬CA1區(qū)表達減弱，在皮層、海馬 CA3區(qū)表達增強，ZD7288可明顯抑制上述現(xiàn)象。p-NR2A主要表達于胞漿，海

6、馬DG區(qū)無表達，與假手術(shù)組比較，p-NR2A在模型組海馬CA1、CA3區(qū)表達增強，在皮層表達減弱，ZD7288可以明顯抑制上述現(xiàn)象。e. NR2B主要表達胞體突起，胞膜上也有少量表達，與假手術(shù)組比較，NR2B在模型組皮層、海馬CA1區(qū)表達減弱，在海馬CA3、DG區(qū)表達增強，ZD7288可明顯抑制上述現(xiàn)象。p-NR2B主要表達于胞漿、胞核，與假手術(shù)組比較，p-NR2B在模型組皮層、海馬CA3區(qū)、DG區(qū)表達增強，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)

7、象，模型組及ZD7288組在海馬CA1區(qū)的表達無明顯變化。f. NR3A主要表達于胞漿，與假手術(shù)組比較，NR3A在模型組皮層、海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)、DG區(qū)表達減弱，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)象。g. NR3B主要表達于胞漿、胞核，海馬CA3區(qū)無表達。與假手術(shù)組比較，NR3B在模型組皮層、海馬CA1區(qū)、DG區(qū)表達減弱，ZD7288可明顯抑制這一現(xiàn)象。
　　結(jié)論：HCN通道抑制劑ZD7288對腦缺血2h再灌注22h大鼠具有神經(jīng)保護