PDE4抑制劑FCPR16對腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：FCPR16是本實驗室合成的新型磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑，具有潛在的抗炎作用。本研究利用SH-SY5Y細胞建立氧糖剝奪(OGD)模型，以及建立大鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)模型，探究FCPR16對腦缺血再灌注損傷的作用及可能的潛在機制。
　　方法：1.進行SH-SY5Y細胞培養(yǎng)，利用Na2S2O4建立OGD模型;采用CCK-8法檢測FCPR16對OGD造模后細胞活力的影響;利用流式細胞術、TUNEL染色、線粒體膜電位檢

2、測的方法分析FCPR16對OGD造模后細胞凋亡的作用;Western blot法檢測FCPR16對相關凋亡蛋白變化的影響;分離提取細胞線粒體蛋白和胞漿蛋白，Western blot法檢測FCPR16對線粒體和胞漿中Cyt C蛋白變化的影響;Western blot檢測FCPR16對OGD造模后CREB、p-CREB的作用。
　　2.采用線栓法建立MCAO模型;大鼠缺血2h后，腹腔注射2.5、5、10mg/kg FCPR16，再灌注

3、24h，進行神經功能行為評分;TTC染色測定FCPR16對MCAO模型大鼠腦梗死面積的影響;利用HE染色觀察腦組織的形態(tài)學變化;用ELISA法和Western bolt法分別檢測FCPR16對血清和腦組織中炎癥因子含量變化的影響;通過免疫熒光和Western bolt的方法檢測Iba-1和GFAP的表達情況;TUNEL染色檢測FCPR16對MCAO模型大鼠細胞凋亡的作用，Western bolt法檢測凋亡相關蛋白的變化情況;用ELISA

4、法檢測腦組織中cAMP的含量，Western bolt法檢測FCPR16對CREB、p-CREB表達變化的影響。
　　結果：第一部分實驗結果發(fā)現(xiàn):1.利用10mmol/L Na2S2O4和無糖培養(yǎng)基處理SH-SY5Y細胞4h，再培養(yǎng)24h，建立OGD模型。5μM、10μM和20μMFCPR16能呈濃度依賴性地提高OGD造模后細胞的存活率。2.流式細胞術、TUNEL染色結果表明，5μM、10μM和20μM FCPR16能夠在不同程度

5、上減少OGD造模后細胞的凋亡。3.線粒體膜電位檢測發(fā)現(xiàn)FCPR16能夠減弱OGD造模后線粒體膜電位的下降。Western bolt結果發(fā)現(xiàn)FCPR16減少OGD造模后細胞中Caspase-3的含量，增加Bcl-2/Bax的比值和磷酸化Akt蛋白水平，以及減少細胞線粒體的Cyt C向胞漿中的釋放。4.FCPR16能夠增加OGD造模后CREB磷酸化水平。
　　第二部分實驗結果發(fā)現(xiàn):1.2.5，5，10mg/kg FCPR16能不同程度

6、地改善MCAO大鼠的神經功能癥狀，減少腦梗死面積。HE染色結果表明FCPR16能改善MCAO模型大鼠腦組織的病理性變化和減輕水腫。2.MCAO造模后大鼠血清和缺血腦組織中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量顯著增加，2.5，5，10mg/kgFCPR16能劑量依賴性的降低這些炎癥因子的增加。3.免疫熒光和Western bolt結果表明FCPR16減弱了大鼠缺血腦組織中GFAP和Iba-1的表達水平。4.FCPR16減少MCA

7、O大鼠的神經細胞凋亡，減少腦組織中Caspase-3的含量，增加Bcl-2/Bax，以及增加磷酸化Akt表達水平。5.FCPR16增加MCAO大鼠腦組織中cAMP的含量，增加磷酸化CREB的表達水平。
　　結論：1.PDE4抑制劑FCPR16能提高OGD造模后SH-SY5Y細胞的存活率，改善由線粒體途徑介導的細胞凋亡，其作用可能與激活CREB通路有關。
　　2.FCPR16能改善MCAO大鼠的神經功能癥狀，減少腦梗死面積，改