人參皂甙Rb1對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)C57-BL6小鼠肥胖的預(yù)防作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:肥胖指體內(nèi)脂肪積累過(guò)多，是由于能量攝入大于消耗所致。肥胖是一種慢性疾病，同時(shí)也是心腦血管疾病、2型糖尿病、骨關(guān)節(jié)病、某些腫瘤等慢性病和社會(huì)心理障礙的重要危險(xiǎn)因素，也是導(dǎo)致早死、致殘、影響生命質(zhì)量和增加各國(guó)財(cái)政負(fù)擔(dān)的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。近幾十年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式變化，全球肥胖率呈現(xiàn)持續(xù)上升趨勢(shì)，預(yù)防肥胖的流行已成為全球面臨的最重大的公共衛(wèi)生挑戰(zhàn)。目前的肥胖綜合干預(yù)治療安全可靠，但是受到飲食、運(yùn)動(dòng)、靜息式生活方式等多種綜合因素影

2、響，效果較難維持；而藥物減肥對(duì)于身體的副作用較大或者尚不明確，且藥物減肥與手術(shù)治療都同樣存在反彈的問(wèn)題。尋找安全有效的減肥保健品成為一條可能的途徑。
　　 與此同時(shí)，在飲食誘導(dǎo)肥胖模型的研究中，人們發(fā)現(xiàn)某一特殊食物使一部分個(gè)體發(fā)展為肥胖。而另一部分吃相同食物的個(gè)體沒(méi)有發(fā)生肥胖。因此，有人提出食物誘導(dǎo)肥胖抵抗假說(shuō)：即致肥胖飲食在體內(nèi)產(chǎn)生一種代償反應(yīng)，使機(jī)體能夠預(yù)防肥胖的發(fā)生。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道同一品系、同一批小鼠飼用相同的高脂飼料，其中部

3、分發(fā)生肥胖，部分不發(fā)生肥胖，前者被稱(chēng)為肥胖傾向(obesity prone，OP)，而后者被稱(chēng)為肥胖抵抗(obesityresistance，OR)，具體機(jī)制尚不十分清楚。本文旨在通過(guò)探討植物提取物單體對(duì)于肥胖小鼠的預(yù)防肥胖的作用及機(jī)制的同時(shí)，排除肥胖抵抗對(duì)于肥胖研究的影響，比較單體與飲食改變的作用效果強(qiáng)弱，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)預(yù)防肥胖的保健品提供依據(jù)。
　　 人參(panax ginseng C.A.Meyer)是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥，

4、具有大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)氣益肺、生津止渴、安神益智等功效，屬五加科草本植物。中國(guó)古老的藥學(xué)典籍《神農(nóng)本草經(jīng)》把人參列為上品，言其具有“主補(bǔ)五臟、安精神、定魂魄、止驚悸、明目、開(kāi)心益智，久服有輕身延年之功效”。人參素有“百草藥王之美稱(chēng)，應(yīng)用于中醫(yī)臨床已有二千多年的歷史，由于其具有廣泛的藥理作用和醫(yī)療用途，因而受到國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者的重視，人參許多新的生物活性也相繼被發(fā)現(xiàn)。近年來(lái)，一些臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明人參和西洋參及其主要活性成分人參皂甙具有降低血

5、糖，增加胰島素敏感性，減輕體重，調(diào)節(jié)糖脂代謝的作用，但其作用機(jī)制并不十分清楚。有研究發(fā)現(xiàn)人參提取物能促進(jìn)糖尿病小鼠脂肪組織PPARγ的mRNA和蛋白水平，其中人參皂甙Rb1經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)作為PPARγ配體，通過(guò)上調(diào)PPARγ2，C/EBPα的表達(dá)促進(jìn)脂肪細(xì)胞的脂肪形成，增加基礎(chǔ)和胰島素刺激的葡萄糖利用，同時(shí)抑制基礎(chǔ)脂解。表明人參和人參皂甙抗糖尿病的作用可能與促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化，胰島素敏感性和抑制基礎(chǔ)脂解有關(guān)。此外，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Rb1通

6、過(guò)中樞NPY和外周CCK作用對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠有減輕體重和脂肪含量的作用。
　　 本課題基于現(xiàn)今關(guān)于肥胖和肥胖抵抗的最新研究進(jìn)展，用高脂、高能飼料制備符合臨床特點(diǎn)的肥胖與肥胖抵抗型C57/BL6小鼠模型，研究Rb1對(duì)肥胖預(yù)防的效果，比較Rb1對(duì)于肥胖的作用與單純改變飲食對(duì)于代謝和食欲的調(diào)節(jié)差異。進(jìn)行為期3w的Rb1干預(yù)實(shí)驗(yàn)，觀察小鼠進(jìn)食量，體重變化以及血脂，血糖變化，并采用ELISA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)肥胖與肥胖

7、抵抗型C57/BL6小鼠在Rb1干預(yù)后中樞和外周血的NPY以及PYY的水平，為進(jìn)一步探討人參皂甙Rb1的對(duì)于肥胖防治機(jī)制及功能性保健食品的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 清潔級(jí)雄性健康野生型C57/BL6小鼠70只，體重(21.6g±1.3g)，按體重排序后讀取電腦隨機(jī)數(shù)字表抽取8只作為空白對(duì)照組，剩余62只用于制備肥胖與肥胖抵抗型小鼠模型。空白對(duì)照組(N)：每鼠每天自由飲水及進(jìn)食普通飼料，造模組進(jìn)食高脂飼料連續(xù)

8、12w后稱(chēng)量體重時(shí)，參考體重大于N組的平均體重+1.96倍標(biāo)準(zhǔn)差和大于正常體重的20％的標(biāo)準(zhǔn)，將體重最大的20只作為肥胖組(DIO)；肥胖抵抗組(DR)：參考體重小于C組的平均體重+1.0倍標(biāo)準(zhǔn)差，將體重最小的10只作為DR組，余棄除。小鼠自由進(jìn)食，每天觀察小鼠的一般狀況、飲食變化、行為(自主活動(dòng)、精神狀態(tài))變化、毛發(fā)變化，每天稱(chēng)量飼料，每周稱(chēng)量小鼠體重。造模完成后記錄48小時(shí)各組小鼠的進(jìn)食量和能量攝入量作為基礎(chǔ)參考值。
　　

9、造模12W后根據(jù)體重分為肥胖型小鼠、肥胖抵抗型小鼠和正常對(duì)照組，肥胖組抽取5只為繼續(xù)高脂喂養(yǎng)組(HF)，5只高脂飲食變?yōu)榈椭胀嬍车娘嬍掣淖兘M(DC)，余10只為Rb1干預(yù)組。于第13w開(kāi)始時(shí)給予DIO和DR組小鼠Rb1腹腔注射，同時(shí)給予普通對(duì)照組10％的乙醇稀釋液進(jìn)行注射3w。
　　 在注射3w結(jié)束時(shí)，小鼠禁食12h后，摘眼球取血，用于測(cè)定TC、TG、HDL、LDL、glucose，NPY和PYY水平；血取凈后，立即進(jìn)行解剖

10、，留取左葉肝臟于10％福爾馬林溶液中固定，用于病理檢測(cè)；同時(shí)迅速分離下丘腦，取完整小腸和小腸生理鹽水漂凈后置于液氮中保存，用于NPY和NPYY2以及PYY測(cè)定。3w內(nèi)每日記錄各組小鼠進(jìn)食量，稱(chēng)取每只小鼠體重，觀察小鼠變化。免疫熒光酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中NPY，PYY的表達(dá)水平。兩步法實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)下丘腦組織和腸道組織的NPY，NPY Y2以及PYYmRNA表達(dá)。
　　 選擇SPSS13.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，

11、P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果:
　　 1、高脂、高能飼料制備肥胖與肥胖抵抗小鼠模型建立
　　 DR與DIO組體重有顯著性差異，DR與N組體重?zé)o顯著性差異，DIO與N組體重有顯著性差異。
　　 2、人參皂甙Rb1對(duì)肥胖與肥胖抵抗型C57/BL6小鼠體重和代謝的影響。
　　 病理結(jié)果顯示，HF組小鼠肝臟出現(xiàn)嚴(yán)重的脂肪變性，而其余各組的肝臟病理正常。DIO小鼠的能量攝入量高于其他各組，盡

12、管DR組小鼠的進(jìn)食量低于N組小鼠，但是其能量攝入量基本相當(dāng)。Rb1進(jìn)行干預(yù)治療以后，DIO-Rb1組小鼠的體重在第1w內(nèi)急劇下降，后2w下降速率降低趨于平穩(wěn)，基本維持在跟飲食組小鼠減重后的水平。DC組小鼠的體重3w內(nèi)也下降，第1w內(nèi)的降低速率最大，后平穩(wěn)的下降。
　　 空腹血糖結(jié)果顯示：與普通對(duì)照組相比，HF組與DC組的血糖與之有差異，其余各組均無(wú)顯著性差異；與高脂組相比，各組血糖均有顯著性差異；血脂結(jié)果顯示：與N組相比，DIO

13、-Rb1組的TCH和HDL與之有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，DR-Rb1組的HDL和LDL與之有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，HF組的TCH和HDL與之有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與DIO-Rb1組相比，N組和DR-Rb1組的TCH和HDL與之有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，DR-Rb1組的TCH和LDL與有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與HF組相比，各組的HDL與之均有差異，N，DIO-Rb1，DC組的TCH與之有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，DR-Rb1的LDL與之又統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 3、血清NPY，PYY

14、在人參皂甙Rb1治療飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型小鼠中的表達(dá)。
　　 DIO-Rb1組的NPY值與DC和HF組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，使用Rb1注射的兩組與N組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；除DIO-Rb1以外，N組PYY值與其余各組都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，N組與DIO-Rb1組跟HF之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與DIO-Rb1組相比，DR-Rb1，DC，HF組的PYY值都與之有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 4、下丘腦NPY，N

15、PY Y2的mRNA，小腸PYY的mRNA在飲食誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗型小鼠中的表達(dá)。
　　 N，DIO-Rb1，DR-Rb1，DC組下丘腦的NPY mRNA水平明顯低于HF組，這四組間沒(méi)有顯著性差異(P＜0.05)；N，DIO-Rb1，DR-Rb1，DC組下丘腦的NPY-Y2 mRNA水平與HF相比有顯著性差異，但是只有DIO-Rb1組的水平低于HF組，其他各組均高于HF組。在小腸內(nèi)PYY mRNA的水平來(lái)看，N，DIO-Rb1，

16、DR-Rb1，DC各組顯著低于HF組(P＜0.05)，其余各組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 1.用高脂高能飼料成功制備肥胖與肥胖抵抗型小鼠模型。
　　 2.Rb1腹腔注射可以對(duì)肥胖小鼠起到降低體重，改善血糖的作用，對(duì)血脂的改變主要體現(xiàn)在Tch和HDL水平上。Rb1的作用體現(xiàn)在第1w內(nèi)的迅速將體重作用上，小鼠的進(jìn)食量和能量攝取均再第1w內(nèi)顯著下降。
　　 3.Rb1通過(guò)提高血清的PYY水平，抑制了