PRAME在肺癌骨轉移中的調控作用的機制研究.pdf

1、研究目的：
　　癌癥類型中，肺癌是發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤之一，約有30％～40％的中晚期肺癌病人會發(fā)生骨轉移，嚴重危害人類的健康和生活質量。黑色素瘤特異性抗原(Preferentially expressed antigen of melanoma，PRAME)是于眾多黑色素瘤病人群體中篩查得出，它是一種表面抗原，細胞毒性T淋巴細胞可以識別PRAME，隨即引發(fā)特異腫瘤的相關性溶解。目前，國內外研究已確定PRAME可以作為一個判斷

2、該腫瘤患者預后及復發(fā)情況的重要指標，PRAME在原發(fā)性骨肉瘤，皮膚鱗狀細胞癌等腫瘤中的表達高低也預示著腫瘤的演出轉移情況。為了闡明PRAME在肺癌骨轉移及其對下游基因信號通路調控的作用機制，設計了本實驗研究。
　　研究方法:
　　1.檢測正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及骨轉移腫瘤標本中PRAME表達水平獲取正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及肺癌骨轉移腫瘤組織，通過蛋白質免疫印記檢測蛋白電泳及實時定量聚合酶鏈式反應等檢測明確PRAME，

3、E-cadherin在表達水平上的差異及意義。
　　2.檢測PRAME對肺癌細胞系遷移及侵襲能力的影響體外驗證PRAME基因在肺癌骨轉移中的影響，建立穩(wěn)定敲除PRAME的肺癌骨轉移亞克隆細胞系PC9及A549，利用MTT，侵襲實驗等技術檢測細胞遷移和增殖能力及PRAME對E-cadherin蛋白水平和RNA水平的影響。
　　3.小鼠骨腫瘤模型中PRAME表達水平對肺癌骨轉移的影響骨內局部注射法利用上述PC9細胞系建立小鼠脛骨

4、肺癌骨轉移模型，通過實時定量聚合酶鏈式反應，蛋白質免疫印記檢測，免疫組化等方法檢測PRAME基因的表達與E-cadherin蛋白水平的關系，通過X-Ray，熒光標記活體成像等方法對小鼠腫瘤模型進行評估。
　　研究結果:
　　1.檢測正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及骨轉移腫瘤標本中PRAME表達水平蛋白質免疫印記檢測及實時定量聚合酶鏈式反應的結果證實正常人肺組織、肺癌原位腫瘤及肺癌骨轉移腫瘤組織中PRAME及E-cadherin均

5、有表達，其中正常人肺組織中的表達水平最高，骨轉移組織最低。
　　2.檢測PRAME對肺癌細胞系遷移及侵襲能力的影響體外實驗中，抑制PC9及A549的PRAME基因的表達，細胞遷移及增值活性上均明顯低于對照組細胞系，同時E-cadherin蛋白表達水平與PRAME基因呈正相關。
　　3.小鼠骨腫瘤模型中PRAME表達水平對肺癌骨轉移的影響通過X-Ray照射發(fā)現(xiàn)抑制PRAME基因組的骨侵蝕的現(xiàn)象明顯強于對照組，熒光標記活體成像結