低濃度毒死蜱對小鼠胚胎神經(jīng)前體細(xì)胞周期性核運(yùn)動及胚胎海馬細(xì)胞的影響.pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱(Chlorpyrifos，CPF)能影響發(fā)育期神經(jīng)細(xì)胞增殖和分化，其作用機(jī)制尚不清楚。周期性核運(yùn)動(interkinetic nuclearmigration，INM)是頂端面神經(jīng)前體細(xì)胞(apical progenitors，APs)在細(xì)胞增殖周期中沿著腦室壁的頂?shù)纵S進(jìn)行的核往返性移動，是胚胎神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生中的特征性事件，也是成熟腦發(fā)育的基礎(chǔ)。海馬作為成熟腦學(xué)習(xí)記憶與行為的機(jī)能中心，形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變與認(rèn)知行為異常具有密切

2、的關(guān)聯(lián)。本文主要從胚胎神經(jīng)前體細(xì)胞周期性核運(yùn)動和胚胎期海馬形態(tài)角度評估胚胎早期CPF暴露對腦發(fā)育所產(chǎn)生的影響。
　　 首先建立孕鼠模式，在胚胎期14天(embryo days14，E14)以3小時為間隔，連續(xù)3次皮下注射5mg/kg CPF，對照組給予等量二甲基亞砜，在首次暴露CPF0.5小時、3.5小時或5.5小時腹腔注射50mg/kg溴脫氧尿苷(5-bromo-2’-deoxyuridine，Brdu)，標(biāo)記S期細(xì)胞，形成不

3、同時間段核被標(biāo)記的胚胎。首次暴露CPF6.5小時處死孕鼠，剝離胚胎，多聚甲醛固定后石蠟包埋，免疫組化染色，顯微鏡下計數(shù)腦室區(qū)(ventricular Zone，VZ)和腦室下區(qū)(subvertricularzone)中Brdu標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)，分析比較Brdu陽性細(xì)胞核在VZ和SVZ不同區(qū)域所占的百分比，從而評估CPF暴露對INM的即時影響。
　　 然后在胚胎E7.5-E11.5連續(xù)5天暴露5mg/kg/d CPF，E14注射50m

4、g/kg Brdu，分別于1，3，6，9小時處死孕鼠，胚胎腦免疫組化染色后顯微鏡下觀察，評估CPF對胚胎神經(jīng)前體細(xì)胞的INM行為是否存在滯后效應(yīng)。
　　 為了進(jìn)一步評估CPF的暴露是否通過影響海馬形態(tài)發(fā)育造成遠(yuǎn)期認(rèn)知行為學(xué)改變，實(shí)驗(yàn)設(shè)計了于E7.5-E11.5暴露CPF的E16胚胎，腦組織進(jìn)行冠狀位連續(xù)切片，尼氏染色，取海馬區(qū)3個標(biāo)準(zhǔn)平面，分別計數(shù)和分析細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞形態(tài)。
　　 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在即時暴露CPF實(shí)驗(yàn)中，C

5、PF處理使周期性核運(yùn)動遷移速度變慢，具體表現(xiàn)：Brdu標(biāo)記后1hr，位于VZ外層的陽性細(xì)胞核增加8.3％，而中間層減少40.1%(P<0.01)；Brdu標(biāo)記后3hr，位于VZ外層的陽性細(xì)胞核增加10.6%，中間層增加61.1%，而遷往VZ內(nèi)層則減少82.0%，均存在極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；Brdu標(biāo)記后6hr，位于VZ外層的陽性細(xì)胞核增加25.1%，中間層增加39.3%，而VZ里層減少22.2%(P<0.01)。
　　

6、 在預(yù)先暴露CPF實(shí)驗(yàn)中，CPF暴露對周期性核運(yùn)動存在滯后效應(yīng)，即在停止暴露CPF后，核運(yùn)動速度仍然變慢。具體表現(xiàn)：Brdu標(biāo)記后1hr，位于VZ外層的陽性細(xì)胞核增加6.5%，而中間層減少22.4%(P<0.01)；Brdu標(biāo)記后3hr，位于VZ中間層增加39.8%，而遷往VZ內(nèi)層則減少25.9%，均存在極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；Brdu標(biāo)記后6hr，位于中間層增加15.1‰而VZ內(nèi)層減少11.7%(P<0.01)。Brdu標(biāo)

7、記后9hr，位于VZ外層的陽性細(xì)胞核減少12.2%(P>0.05)，中間層減少22.5%(P<0.01)，VZ內(nèi)層無明顯改變，而SVZ區(qū)域增加95.3%，兩者之間存在極顯著差異(P<0.01)。
　　 研究胎鼠海馬形態(tài)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過CPF處理后，海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)細(xì)胞數(shù)量沒有明顯的變化，但比較DG區(qū)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞數(shù)量平均減少8.06%，前者存在顯著差異，后兩者存在極顯著差異。因此對照組和CPF組DG之間細(xì)胞數(shù)量在統(tǒng)計學(xué)上存在差異。這