有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱對(duì)小鼠胚胎神經(jīng)前體細(xì)胞增殖分化的影響.pdf

1、以毒死蜱（Chlorpyrifos,CPF）為代表的有機(jī)磷農(nóng)藥廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，其低劑量長(zhǎng)期暴露于環(huán)境中，對(duì)公眾健康和生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重的威脅。CPF因其具有潛在的神經(jīng)毒性而備受關(guān)注。在體研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育敏感期CPF暴露會(huì)導(dǎo)致大腦區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞和結(jié)構(gòu)的改變，并引起子代神經(jīng)行為的永久性損傷，但CPF是如何引起大腦結(jié)構(gòu)和神經(jīng)行為改變的機(jī)制還不甚明了。本文主要通過(guò)胚胎期（Embryonic,E）暴露CPF研究對(duì)腦室區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞增殖周期G2/

2、M時(shí)相長(zhǎng)度的影響以及對(duì)新生Tbr1+神經(jīng)元和軀體感覺(jué)皮層（somatosensorycortex,S1）組織結(jié)構(gòu)的影響，進(jìn)一步探究胚胎期CPF暴露對(duì)子代神經(jīng)發(fā)育的毒性機(jī)制。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在神經(jīng)發(fā)育早期（E7.5-E11.5）暴露亞中毒閥劑量CPF制備孕鼠染毒模型，染毒小鼠在 E14用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine，Brdu)進(jìn)行單次注射，標(biāo)記處于S期的細(xì)胞，將標(biāo)記后0.5 h,1.0 h,1

3、.5 h,2.0 h和2.5 h的胚胎進(jìn)行組織切片與Brdu免疫組化染色，計(jì)數(shù)側(cè)腦室壁VZ區(qū)Brdu+細(xì)胞數(shù)和有絲分裂細(xì)胞數(shù)，計(jì)算Brdu+細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)和細(xì)胞周期G2/M時(shí)相長(zhǎng)度,從而分析CPF對(duì)胚胎神經(jīng)前體細(xì)胞增殖細(xì)胞數(shù)量和增殖時(shí)間歷程的影響。隨后，我們對(duì)同樣劑量染毒的胚胎鼠進(jìn)行不同發(fā)育時(shí)日的動(dòng)態(tài)觀察，研究CPF對(duì)E12/E14側(cè)腦室壁細(xì)胞分層密度以及E14/E16/E18軀體感覺(jué)皮層細(xì)胞密度的影響，最后通過(guò)Tbr1免疫組化染色探討C

4、PF對(duì)E14側(cè)腦室壁新生神經(jīng)元分化命運(yùn)的影響。
　　研究結(jié)果表明：妊娠早期CPF暴露減少了胚胎側(cè)腦室壁S期細(xì)胞數(shù)量，并將VZ區(qū)增殖細(xì)胞G2和M期時(shí)相時(shí)長(zhǎng)延緩17.3％和50.3%。我們還發(fā)現(xiàn)，CPF導(dǎo)致E12增殖層（VZ）細(xì)胞數(shù)量減少21.8%，分化層（PP）細(xì)胞數(shù)量增加63.9%；CPF導(dǎo)致E14增殖層（VZ和SVZ）細(xì)胞數(shù)量降低22.2%，但分化層（IZ和CP）細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯變化。對(duì)軀體感覺(jué)皮層的研究發(fā)現(xiàn)，CPF對(duì)E14的細(xì)胞