膜片鉗技術(shù)研究大麻素-食欲素通路干預(yù)海馬神經(jīng)元放電機(jī)制.pdf

1、目的：
　　采用膜片鉗技術(shù)研究大麻素、食欲素受體通路對海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元放電的影響及可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　將出生15-20天的Wistar大鼠取腦，急性分離出單個CA1區(qū)錐體神經(jīng)元，用膜片鉗技術(shù)記錄神經(jīng)元電活動，觀察非選擇性大麻素受體激動劑Win55212-2、非選擇性食欲素受體激動劑Orexin A對神經(jīng)元靜息電位、自發(fā)發(fā)放頻率等影響。在大麻素實驗中，根據(jù)神經(jīng)元對Win55212-2的反應(yīng)分為超極化組

2、和去極化組;在食欲素實驗中，根據(jù)神經(jīng)元自身放電頻率，將其分為低頻組和高頻組。采用MTT染色法驗證組織切片及神經(jīng)元活性。
　　結(jié)果：
　　第一部分（大麻素實驗組）:給予大麻素受體激動劑Win55212-2，與給藥前比較，給藥期間超極化組神經(jīng)元動作電位頻率減少、膜電位顯著降低[0 Hz vs.(4.3±3.2) Hz，p＜0.05;(-57.0±4.6) mV vs.(-54.1±3.8) mV, p＜0.01];與給藥期間比較

3、，停止給藥后神經(jīng)元動作電位頻率增加、膜電位升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。與給藥前比較，給藥期間去極化組神經(jīng)元動作電位頻率顯著減少[0 Hz vs.(6.2±3.6)Hz，p＜0.01]，膜電位顯著升高[(-45.0±4.7) mV vs.(-47.3±4.4) mV, p＜0.01];與給藥期間比較，停止給藥后神經(jīng)元動作電位頻率增加，膜電位降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。這些作用在部分神經(jīng)元可被大麻素受體1拮抗劑AM2

4、51削弱;電壓依賴性鉀離子通道的非選擇性阻滯劑四乙胺-TEA(tetraethylammonium，2μmol/L)也可在不同程度上逆轉(zhuǎn)超極化組大麻素受體激動劑抑制神經(jīng)元電活動的作用。
　　第二部分（食欲素實驗組）:給予食欲素受體激動劑Orexin A，在低頻組中，Orexin A激活了58％(28/48)神經(jīng)元，給藥期間神經(jīng)元放電頻率明顯多于給藥前，(5.36±3.64 Hz vs.1.43±0.88 Hz，p＜0.05);而停

5、止給藥后與給藥期間(3.00±2.85 Hz vs.5.36±3.64 Hz，p=0.052)、停止給藥后與給藥前(3.00±2.85 Hz vs.1.43±0.88 Hz，p=0.136)的頻率相比較，無統(tǒng)計學(xué)差異。在高頻組中，OrexinA激活了40％(4/10)神經(jīng)元。給藥期間神經(jīng)元放電頻率明顯多于給藥前，(6.98±2.45 Hz vs.4.93±2.55 Hz，p＜0.05)，停止給藥后與給藥期間相比頻率顯著減少(3.80±1