應用膜片鉗電生理技術研究多肽毒素對鉀離子通道的作用機制.pdf

1、離子通道是膜蛋白的一種，它在生命活動中起著非常重要的作用。由于離子通道的一些突變會導致人類疾病，因此相關藥理學方面的研究也非常重要。目前對離子通道的研究主要有利用X射線晶體衍射或者液體核磁共振技術解析它們的結(jié)構，利用膜片鉗電生理技術研究它們的功能等等。動物多肽毒素通常能夠作用于離子通道，調(diào)節(jié)它們的開放和關閉。它們是研究離子通道結(jié)構與功能的工具，同時也能被改造或修飾，用于疾病的治療。本文中主要用蛋白異源表達純化的方法獲得多肽毒素，用液體核

2、磁共振技術以及膜片鉗電生理技術研究動物多肽毒素和鉀離子通道的相互作用。論文共分為四個章節(jié)。
　　第一章介紹了鉀離子通道和相關動物多肽毒素的基本知識。包括鉀離子通道的類型，鉀離子通道相關疾病以及多肽毒素的種類、結(jié)構，與鉀離子通道相互作用模式等。
　　第二章對膜片鉗電生理技術作了簡單的介紹，包括膜片鉗的幾種基本模式以及衍生技術，主要的相關設備等。
　　第三章是蜈蚣多肽毒素SSD609對KCNQ1/KCNE1鉀離子通道作用機

3、制的研究。作用于KCNQ1/KCNE1鉀離子通道的多肽毒素很少，目前只有兩篇文章報道過相關內(nèi)容，蜈蚣毒腺中提取的SSD609就是其中的一種。而KCNQ1/KCNE1鉀離子通道與人類心臟疾病密切相關，作用于它的毒素有潛在的作為藥物的可能。本章我們通過大腸桿菌異源表達純化的方法獲得較為大量的SSD609多肽毒素，通過膜片鉗電生理技術驗證其抑制Iks電流的功能，證明其與天然狀態(tài)的毒素擁有類似的生理功能。之后利用液體核磁共振技術解析了它的結(jié)構，

4、由三段α螺旋構成，此結(jié)構在動物多肽毒素中非常少見。根據(jù)結(jié)構和功能提供的信息，猜測其作用于KCNE1輔助亞基，因此設計了KCNE1上相關位點的突變，結(jié)合電生理實驗推斷出SSD609與KCNQ1/KCNE1可能的相互作用方式，首次提出多肽毒素作用于輔助亞基，這為以后進一步的研究打下基礎。
　　第四章主要介紹了蝎毒素IbTX的表達純化以及它對BK鉀離子通道的抑制作用。異源表達多肽毒素為一種獲取毒素的常用方法，相對來說這種方法時間短、花費