四味葛花湯解酒保肝實驗研究和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)預(yù)測.pdf

1、目的：
　　葛花是中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中最具代表性的解酒藥物，本實驗以葛花為主料，結(jié)合古藥方解酒理論，在解酒方高頻藥物中選取了三味藥食同源輔料，使用常規(guī)劑量,編制解酒方，研究其對急性酒精中毒小鼠的解酒和保肝作用，并初步探討其作用機制；最后通過分子對接模擬方法，將藥物的主要成分進行蛋白對接分析，探討其解酒保肝的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用靶點，為中藥防治急性酒精中毒開拓新的思路。
　　方法：
　　⑴護肝防醉酒實驗：SPF級昆明種小鼠,雌雄

2、對半,22±2g,隨機分為空白對照組、模型組、葛花解酲湯組、四味葛花湯（高、中、低劑量組）。除空白組給予等容積純化水外，其余給予56度白酒灌胃建立急性酒精中毒的小鼠模型。造模前30min預(yù)防性給予葛花解酲湯和四味葛花湯進行干預(yù)，空白組、模型組給予等容積的純化水。觀察小鼠的醉酒情況，血中乙醇濃度，血清ALT、AST和檢用ELISA法測肝組織勻漿乙醇脫氫酶（ADH）的活性。⑵分子對接研究：通過文獻查找以及中國天然產(chǎn)物化學(xué)數(shù)據(jù)庫檢索四味葛花湯

3、的化學(xué)成分，構(gòu)建四味葛花湯化學(xué)成分分子數(shù)據(jù)庫；通過Atoudocking vina1.分子對接平臺，選取ADH、ALDH、COX-2和OPRM1、NOS、TNF-a6個靶點蛋白選為受體、對四味葛花湯化學(xué)成分進行虛擬篩選；用Cytoscape分析活性成分與靶點的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?、偎奈陡鸹M小鼠的酒精耐受時間較模型組、葛花解酲湯組顯著延長，四味葛花湯組小鼠由“醉酒”到“醒酒”的睡眠持續(xù)時間時間較模型組、葛花解酲湯組

4、顯著縮短，各組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。四味葛花湯高、中、低劑量組的藥效作用強度有一定的量效關(guān)系,高劑量組解酒作用更明顯。②四味葛花湯組各個時相（0.5h、1.5h、3h）的血中乙醇濃度(mg/ml)較模型組顯著降低，各時間點均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。③四味葛花湯組小鼠肝組織勻漿ADH活性較正常組、模型組高，具有極顯著性差異（P均<0．01）。④四味葛花湯組小鼠的血清AST和ALT的含量較模型組明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P

5、均<0．01）。⑤構(gòu)建了含有308個化合物的四味葛花湯化學(xué)成分分子數(shù)據(jù)庫，以ADH、ALDH、COX-2、OPRM1、NOS和 TNF-a為靶點，以原配體打分值為閾值，從四味葛花湯化學(xué)成分分子中分別篩選出與其結(jié)合較好的化合物168、53、20、86、86、17個，視為四味葛花湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。網(wǎng)絡(luò)特征研究結(jié)果顯示藥效物質(zhì)基礎(chǔ)對酒精酒精中毒的治療靶點不是線性關(guān)系，大部分化合物只能作用于一個靶點，僅有小部分化合物能作用于多個靶點。
　

6、　結(jié)論：
　　⑴四味葛花湯有良好的防醉、解酒作用：可顯著延長急性酒精中毒小鼠“醉酒”時間，增強對酒精的耐受力；縮短急性酒精中毒小鼠由“醉酒”狀態(tài)到“醒酒”狀態(tài)的時間，促進醉酒小鼠的蘇醒，其機制可能是減少酒精在胃腸道的吸收和誘導(dǎo)肝組織中ADH活性的增強加速酒精在肝臟的代謝，從而降低小鼠血中酒精的濃度。⑵四味葛花湯具有良好的保肝作用：可顯著降低急性酒精中毒模型小鼠血清ALT、AST活性。⑶分子對接發(fā)現(xiàn)四味葛花湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)包含了25