腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體在多囊卵巢綜合征大鼠中的表達研究.pdf

1、【目的】多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)是青春期及育齡女性中最常見的高度異質性的內(nèi)分泌與代謝紊亂疾病，表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)和不孕、雄激素過多癥狀、肥胖和胰島素抵抗，可引起2型糖尿病、心血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等遠期并發(fā)癥。主要發(fā)病機制為由異常的內(nèi)分泌及旁分泌因子、代謝障礙及卵泡內(nèi)微環(huán)境的改變共同作用導致的卵泡發(fā)育障礙。近年來發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic

2、 factor, BDNF)作為正常卵泡發(fā)育的生理調(diào)節(jié)劑，在卵泡發(fā)育、卵母細胞成熟及早期胚胎發(fā)育等過程中起著重要作用。本研究通過構建 PCOS大鼠模型，探討B(tài)DNF及受體酪氨酸激酶受體B(tyrosine receptor kinaseB,TrkB)在PCOS大鼠卵巢中的表達情況，從分子水平揭示BDNF-TrkB對PCOS患者卵泡發(fā)育障礙可能的病理生理機制。
　　【方法】應用來曲唑誘導大鼠 PCOS模型，模型組大鼠20只灌胃服用來

3、曲唑1mg·kg－1·d－1（溶于1％羧甲基纖維素中），對照組灌胃服用1%羧甲基纖維素，兩組均連續(xù)灌服21d。灌胃期間每日定時做大鼠陰道涂片加吉姆薩染色以監(jiān)測兩組大鼠的動情周期有無改變。造模后應用放射免疫法測定血清 FSH、LH、E2、P、T水平，HE染色法觀察卵巢組織學變化，Real-time PCR法檢測模型組與對照組大鼠卵巢組織中BDNF及TrkB基因的表達，Western blot法檢測兩組大鼠卵巢組織中BDNF及TrkB蛋白的

4、表達水平差異，免疫組織化學法檢測 TrkB在兩組大鼠卵巢組織中的定位表達及其在不同級別卵泡中的表達差異。采用SAS9.0統(tǒng)計軟件包進行分析，結果采用x±s進行統(tǒng)計描述，組間比較均采用獨立樣本t檢驗。檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　【結果】模型組大鼠在應用來曲唑后80%大鼠動情周期失去規(guī)律性變化。與對照組比較，模型組血清T、LH、FSH濃度顯著增高，E2、P濃度顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

5、。模型組卵巢體積增大，囊狀擴張卵泡明顯增多，黃體數(shù)量明顯減少。模型組卵巢組織中BDNFmRNA表達量顯著高于對照組(P<0.05)，而TrkB mRNA顯著低于對照組(P<0.05)。BDNF蛋白在 PCOS模型組卵巢組織中的表達量顯著高于對照組，F(xiàn)l-TrkB在模型組的表達明顯高于對照組，而tr-TrkB在模型組的表達明顯低于對照組，均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。TrkB在兩組卵巢的顆粒細胞和卵母細胞上的表達量不同，其中TrkB在模

6、型組大竇前卵泡的顆粒細胞中的表達強度明顯高于對照組，在卵母細胞中的表達強度明顯低于對照組，TrkB在模型組囊狀卵泡的顆粒細胞中的表達強度遠高于對照組竇狀卵泡顆粒細胞的表達，均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。TrkB在各級卵泡的顆粒細胞上的表達未見明顯差異，而在卵母細胞上的表達呈遞減趨勢，即在原始卵泡卵母細胞上表達最強，然后隨著卵泡發(fā)育 TrkB在卵母細胞上的表達逐漸減弱。
　　【結論】來曲唑誘導的PCOS大鼠模型是研究PCOS病理生