溫陽活血解毒復(fù)方對(duì)HUVEC功能和VEGFs-VEGFRs信號(hào)通路的影響及臨床研究.pdf

1、目的:
　　動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊形成是心血管疾病的重要基礎(chǔ)之一，其導(dǎo)致的急性冠脈綜合征等急危重癥長久以來一直是頭號(hào)健康殺手。近年研究發(fā)現(xiàn)，病理性血管新生過程及其調(diào)控因子與慢性炎癥、動(dòng)脈硬化等眾多病理生理過程和（或）慢性疾病均有較密切的關(guān)系，并初步證實(shí)其與斑塊易損性的相關(guān)性。因此將斑塊內(nèi)血管新生作為標(biāo)靶進(jìn)行干預(yù)、影響斑塊的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸，可能是今后防治相關(guān)疾病的研究方向之一。ACS在傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中可歸屬于心痛病，其防治的理論體系與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)

2、亦歷經(jīng)數(shù)千年錘煉，有不少獨(dú)到之處值得深入挖掘與解析:如近年來結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的炎癥學(xué)說及中醫(yī)病因病機(jī)特點(diǎn)總結(jié)提出的溫陽活血解毒法即是一例。故本研究從干預(yù)斑塊內(nèi)血管新生角度出發(fā)，探討溫陽活血解毒復(fù)方穩(wěn)定易損斑塊的可能作用機(jī)理，同時(shí)結(jié)合臨床觀察評(píng)價(jià)溫陽活血解毒法的應(yīng)用效果，以期豐富中醫(yī)藥防治心血管急癥的理論，擴(kuò)展防治斑塊的療法。
　　方法:
　　本研究分為實(shí)驗(yàn)研究與臨床觀察兩部分。實(shí)驗(yàn)部分，采用藥物血清干預(yù)離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

3、(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及分子檢測(cè)觀察其效果。細(xì)胞培養(yǎng)使用高糖型DMEM+FBS(DMEM∶ FBS=8∶2)常規(guī)培養(yǎng)，取4代至7代的細(xì)胞備用。藥物巾清采白SD大鼠，用溫陽活血解毒復(fù)方低、中、高劑量及生理鹽水每12小時(shí)灌胃1次(8a.m.～8p.m.)。在灌胃72小時(shí)（3天）、120小時(shí)（5天）后，提取末次給藥1h后、2h后的藥物血清，以之干預(yù)細(xì)胞。分別用細(xì)

4、胞毒性檢測(cè)（CCK-8）、bFGF細(xì)胞管形成試驗(yàn)、transwell裝置觀察藥物血清對(duì)HUVEC增殖、分化、運(yùn)動(dòng)能力的影響。用Western Blot檢測(cè)血清干預(yù)后細(xì)胞VEGFR-1、-2及下游信號(hào)分子的表達(dá)情況，觀察其對(duì)血管新生相關(guān)主要信號(hào)分子的影響。
　　臨床觀察部分，參照相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)納入30例不穩(wěn)定心絞痛患者，隨機(jī)分入西藥組與綜合組（各15例）。西藥組按照治療規(guī)范給予常規(guī)各項(xiàng)治療，綜合組在其基礎(chǔ)上加用在組方上體現(xiàn)溫陽活血解毒

5、法的麝香保心丸與通塞脈片。對(duì)比治療前后的西雅圖生存評(píng)分、中醫(yī)癥候評(píng)分，評(píng)價(jià)溫陽活血解毒法對(duì)不穩(wěn)定心絞痛的療效及患者生存質(zhì)量的影響。
　　成果:
　　體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溫陽活血解毒復(fù)方藥物血清對(duì)HUVEC有明顯的抑制作用(p＜0.01);能有效抑制細(xì)胞分化能力(p＜0.01)、減弱運(yùn)動(dòng)能力(p＜0.05)，抑制程度均與藥物血清濃度呈正相關(guān)。在對(duì)相關(guān)分子的影響方面，各組的VEGFR-1表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，亦無特異

6、性趨勢(shì);但VEGFR-2的表達(dá)量與藥物血清濃度呈負(fù)相關(guān)(p＜0.05)，其下游信號(hào)分子的下調(diào)更明顯，趨勢(shì)與VEGFR-2的表達(dá)情況一致。
　　臨床觀察表明，西藥組與綜合組均可改善不穩(wěn)定心絞痛患者的生存質(zhì)量，兩組間總體療效比較，治療組的臨床療效有優(yōu)于對(duì)照組的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。各量表積分方面，綜合組較同期西藥組的積分下降更明顯(p＜0.01)，說明加用體現(xiàn)溫陽活血解毒法的中成藥后能更好地改善不穩(wěn)定心絞痛患者的癥

7、狀，提升短期生存質(zhì)量。
　　結(jié)論:
　　溫陽活血解毒復(fù)方藥物血清可通過直接下調(diào)血管新生相關(guān)功能型分子、信號(hào)通路的表達(dá)有效地抑制HUVEC的分化、運(yùn)動(dòng)、增殖能力，從而達(dá)到抑制血管新生的效果，這可能為其穩(wěn)定易損斑塊的內(nèi)在機(jī)制之一。在常規(guī)診療方案上加用溫陽活血解毒類中成藥可更好地改善不穩(wěn)定心絞痛患者的癥狀，說明溫陽活血解毒法的確可提高不穩(wěn)定心絞痛的療效?？傮w而言，溫陽活血解毒法可作為有效治療動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的基本方法使用，可為豐富