化濁解毒活血通絡(luò)法對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及P38MAPK信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：在大鼠腦缺血再灌注損傷模型的基礎(chǔ)上，運(yùn)用化濁解毒活血通絡(luò)方進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)對(duì)神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦組織病理形態(tài)改變、用藥后腦梗死體積變化、P-P38MAPK與 Caspase-3的觀察，探討該方法是否通過(guò)抑制 P38MAPK信號(hào)通路來(lái)調(diào)控細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步闡明化濁解毒活血通絡(luò)法對(duì)受損神經(jīng)元產(chǎn)生保護(hù)作用的內(nèi)在機(jī)制。
　　方法：健康雄性SD大鼠54只，隨機(jī)分為6組：分別是假手術(shù)組、模型組、化濁解毒活血通絡(luò)方低劑量組（以下簡(jiǎn)稱“中藥低劑

2、量組”）、化濁解毒活血通絡(luò)方中劑量組（以下簡(jiǎn)稱“中藥中劑量組”）、化濁解毒活血通絡(luò)方高劑量組（以下簡(jiǎn)稱“中藥高劑量組”）和阿司匹林組。采用改良線栓法制備腦缺血再灌注損傷模型，于造模后第2天給予相應(yīng)藥物治療，假手術(shù)組和模型組給予等量生理鹽水灌胃，中藥各劑量組灌服相應(yīng)濃度的化濁解毒活血通絡(luò)方中藥液，阿司匹林組給予阿司匹林混懸液灌胃。連續(xù)灌胃14d后對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，處死后斷頭，每組選取3只大鼠取腦，進(jìn)行TTC染色，測(cè)量梗死范圍

3、。其余6只取右側(cè)大腦半球分別進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察缺血區(qū)大腦皮質(zhì)組織的形態(tài)變化。PCR法分別檢測(cè)腦皮質(zhì)區(qū)P-P38MAPK和Caspase-3 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴神經(jīng)功能缺損評(píng)分：與假手術(shù)組比較，模型組神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，中藥低劑量組、中藥中劑量組神經(jīng)功能缺損無(wú)明顯差異（P＞0.05），中藥高劑量組、阿司匹林組神經(jīng)功能缺損評(píng)分均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與中藥低劑量組

4、比較，中藥中、高劑量組神經(jīng)功能缺損評(píng)分均下降（P＜0.05）；但中藥高劑量組與阿司匹林組相比，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。⑵腦組織病理形態(tài)學(xué)改變：假手術(shù)組大鼠大腦皮層區(qū)腦組織結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞排列整齊緊密，無(wú)變性壞死細(xì)胞；模型組大鼠大腦皮層區(qū)可見(jiàn)明顯缺血區(qū)，腦組織明顯水腫，神經(jīng)組織排列紊亂，細(xì)胞間隙明顯增大，可見(jiàn)大量的細(xì)胞變性壞死；中藥低劑量組腦組織形態(tài)表現(xiàn)與模型組相似；中藥中劑量組、中藥高劑量組及阿司匹林組缺血區(qū)變性壞死細(xì)胞較模型組

5、減少；中藥高劑量組及阿司匹林組可見(jiàn)少量神經(jīng)壞死細(xì)胞，腦組織形態(tài)無(wú)明顯差異。⑶TTC法檢測(cè)大鼠腦梗死體積：與假手術(shù)組相比，各組均存在較明顯的梗死灶，其中模型組與中藥低劑量組梗死體積無(wú)明顯差異（P＞0.05）;中藥中、高劑量組及阿司匹林組梗死體積與模型組相比，均有所減?。≒＜0.05）；中藥中、低劑量組腦梗死體積減少均則不及阿司匹林組（P＜0.05），中藥高劑量組與阿司匹林組相比腦梗死體積無(wú)明顯變化（ P＞0.05）。⑷PCR法檢測(cè)腦組織中

6、Caspase-3的表達(dá)：與假手術(shù)組相比，模型組Caspase-3的表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，各用藥組Caspase-3的表達(dá)水平均降低（P＜0.05）；與中藥低劑量組比較，中藥中劑量、中藥高劑量組及阿司匹林組Caspase-3的表達(dá)降低顯著（P＜0.05）；且中藥中、高劑量組與阿司匹林組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。⑸PCR法檢測(cè)腦組織中P-P38MAPK的表達(dá)：與假手術(shù)組比較，模型組P-P38MAPK的

7、表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，各用藥組P-P38MAPK的表達(dá)水平均降低（P＜0.05）；與中藥低劑量組比較，中藥高劑量組及阿司匹林組P-P38MAPK的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；而中藥高劑量組的表達(dá)與阿司匹林組相當(dāng)，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①化濁解毒活血通絡(luò)方能明顯改善腦缺血再灌注損傷大鼠受損腦組織的病理形態(tài)，降低該模型大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分。②化濁解毒活血通絡(luò)方能夠減小腦