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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.研究川崎病(KD)血清對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κ B)信號(hào)通路的影響,探討該信號(hào)通路與KD發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系。
2.觀察吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)對(duì)KD血清培養(yǎng)下HUVEC活力的干預(yù)作用,探討PDTC的作用機(jī)制和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
方法:
HUVEC隨機(jī)分4組:正常組(N)組,KD組(K組),IVIG組(G組),PDTC組(P組
2、)。N組:RPMI-1640培養(yǎng)液+正常兒童血清,K組:RPMI-1640培養(yǎng)液+KD兒童血清,G組:RPMI-1640培養(yǎng)液+KD兒童血清+IVIG,P組:RPMI-1640培養(yǎng)液+KD兒童血清+PDTC。各組培養(yǎng)24h后,觀察各組細(xì)胞形態(tài),MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力,RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中NF-κB p65mRNA,Iκ BαmRNA,MMP-9 mRNA,ICAM-1mRNA的表達(dá),Western-blotting法檢測(cè)NF-κ
3、B p65蛋白,IκBα蛋白的表達(dá),最后SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。
結(jié)果:
1.K組HUVEC較N組增殖受限,細(xì)胞活力顯著下降(P<0.05),G組和P組細(xì)胞活力較K組顯著增強(qiáng)(P<0.05),G組與P組間細(xì)胞活力無(wú)明顯差異(P>0.05)。
2.K組HUVEC的NF-κ B p65mRNA,Iκ Bα mRNA,MMP-9 mRNA,ICAM-1mRNA表達(dá)水平較N組顯著升高(P>0.
4、05);相對(duì)K組,G組與P組細(xì)胞NF-κ B p65mRNA,Iκ Bα mRNA表達(dá)均降低,且P組比G組降低更加明顯(P<0.05)。
3.K組HUVEC較N組的NF-κ B p65蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05),Iκ Bα蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05);相對(duì)K組,P組與G組NF-κ B p65蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05),且P組比G組降低更加明顯(P<0.05);與K組比較,G組IκBα蛋白表達(dá)輕微升高,但無(wú)
5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),P組Iκ Bα蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)。
4.HUVEC中MMP-9 mRNA,ICAM-1 mRNA與NF-κB p65mRNA表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.87,P<0.01; r=0.63,P<0.01); NF-κB p65蛋白表達(dá)隨IκBα蛋白表達(dá)降低而升高,但相關(guān)性不顯著(R2=0.216);IκBα mRNA表達(dá)與NF-κB p65蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.982,P<0.
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