復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎臟轉化生長因子-β1(TGF-β1)及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)表達影響的實驗研究.pdf

1、復榮通脈膠囊（冀藥制字Z20070041）為滄州中西醫(yī)結合醫(yī)院院內中藥復方制劑。復榮通脈膠囊作為益氣養(yǎng)陰、活血通絡法的經驗方，我院臨床上已廣泛應用于糖尿病周圍神經病變及周圍血管病變的患者，在臨床應用過程中發(fā)現(xiàn)療效顯著，對其他血管病變及慢性并發(fā)癥也具有防治作用。為此我們設計了復榮通脈膠囊防治糖尿病慢性并發(fā)癥系列課題，本研究為其分支研究課題。
　　目的:
　　通過觀察復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎組織中轉化生長因子β1(TGF-β1

2、)及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)表達水平的影響，對復榮通脈膠囊干預糖尿病腎病進展的可能機制進行探討，為臨床上防治糖尿病腎病的應用提供理論依據。
　　方法:
　　將60只清潔級成年雄性Wistar大鼠隨機分為兩組，正常組(NC)10只，造模組50只。將大鼠禁食12h后造模，鏈脲佐菌素(STZ)以60mg/kg劑量進行腹腔注射;并將等量的檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射到NC組大鼠。72h后尾靜脈采血，要求糖尿病大鼠血糖值＞16.7m

3、mol/L。造模成功后大鼠隨機抽取40只，分為糖尿病組(DM，n=10)、復榮通脈膠囊低劑量治療組(FRL，n=10)、復榮通脈膠囊中劑量治療組（FRM，n=10）、復榮通脈膠囊高劑量治療組(FRH，n=10)。成模后一周，中藥治療組劑量按人體-大鼠體表面積比值表換算出大鼠的等效劑量作為復榮通脈中劑量組，給予1.4g/（kg·d）灌胃;FRL組給予0.7g/(kg·d)灌胃，F(xiàn)RH組給予2.8g/(kg·d)灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)8周

4、。NC組和DM組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間大鼠喂標準飼料，飲水自由，保持環(huán)境溫度在22℃-26℃之間，不用胰島素及其他降糖藥物干預。灌胃治療8周后，尾靜脈取血測血糖，以3％戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口，腹主動脈采血，收集血標本。全自動生化分析儀檢測各組大鼠血糖、肌酐(Scr)、尿素氮（BUN）。測定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。取出大鼠雙腎，將腎包膜及腎門結締組織去除，先用生理

5、鹽水沖洗后稱腎重，再置于4％中性福爾馬林溶液中固定、脫水、石蠟包埋、切片厚4μm，采用免疫組化法檢測骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)及轉化生長因子β1(TGF-β1)。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin stainingHE)染色在光鏡下觀察腎小球及腎小管間質的病理變化。計量資料數據以(X)±S表示，各組間比較采用單因素方差分析，各組自身前后對照比較采用配對t檢驗，方差不齊時應用Dunntett T3法。計數資料用X2檢驗

6、。所有數據用SPSS16.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準α=0.05。
　　結果:
　　1、大鼠一般狀態(tài)
　　NC組大鼠精神好，眼睛有神，反應敏捷，毛發(fā)平整有光澤，肌肉充盈，體型適中;各DM組大鼠毛色暗黃無光澤，精神狀態(tài)差，活動減少，攝食量、飲水量及尿量增多，體形消瘦。
　　2、腎重/體重比的變化
　　經灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組腎重/體重比明顯升高(P＜0.05);與DM組比

7、較，F(xiàn)RL、FRM、FRH組腎重/體重比明顯下降(P＜0.05);與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組腎重/體重比明顯下降(P＜0.05);FRM組與FRH組組間相比腎重/體重比無明顯差別(P＞0.05)。
　　3、生化指標的變化
　　3.1 血糖的變化
　　造模前各組大鼠的血糖相比無差異（P＞0.05）。治療前，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖均顯著升高(P＜0.05);而DM組及FRL、FRM、F

8、RH組各組間血糖相比無差異（P＞0.05）。經灌胃治療8周后，各組血糖與治療前相比無差異(P＞0.05);與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠的血糖顯著升高(P＜0.05);DM組及FRL、FRM、FRH組各組間血糖相比無差異(P＞0.05)。
　　3.2 腎功能的變化
　　經灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠血清肌酐、尿素氮水平明顯升高(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL

9、組血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(P＞0.05)，而FRM、FRH組血清肌酐、尿素氮水平明顯下降（P＜0.05）;與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組血清肌酐、尿素氮水平明顯下降(P＜0.05);FRM、FRH組間比較，血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　4、對腎臟組織的病理學觀察
　　光鏡下顯示，NC組為腎小球血管袢薄而清晰，內皮細胞和系膜細胞數目正常，周圍的腎小管也正常。DM組腎小球內皮細胞腫脹、系膜細胞增

10、多;腎小管上皮腫脹，甚至壞死;腎間質有炎細胞浸潤，血管擴張充血。FRL組腎小球內皮細胞增生、腫脹、系膜細胞數目增多;腎小管上皮腫脹，甚至壞死;腎間質有炎細胞浸潤伴有血管擴張充血;FRM、FRH組腎小球內皮細胞和系膜細胞數目大致正常，內皮細胞稍腫脹，腎小管上皮形態(tài)正常，無腫脹、壞死;腎間質有散在炎性細胞浸潤。
　　5、SOD與MDA的變化
　　5.1 SOD的變化經灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組

11、各組大鼠血清SOD水平明顯下降(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL、FRM、FRH組各組大鼠血清SOD水平明顯升高(P＜0.05)。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組血清SOD水平明顯升高（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，血清SOD水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.2 MDA的變化經灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠血清MDA水平明顯升高(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL、F

12、RM、FRH組各組大鼠血清MDA水平明顯下降（P＜0.05）。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組血清MDA水平明顯下降（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，血清MDA水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　6、大鼠腎臟BMP-7及TGF-β1的表達
　　6.1 BMP-7在正常大鼠腎臟組織中正常表達，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠腎臟組織中BMP-7表達明顯減少（P＜0.05）。與DM組比較，F(xiàn)RL、

13、FRM、FRH組大鼠腎臟組織中BMP-7表達明顯增多(P＜0.05)。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組表達明顯增多（P＜0.05）。FRM、FRH組組間比較，表達無明顯差異（P＞0.05）。
　　6.2 TGF-β1在正常大鼠腎臟組織中有少量表達，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠腎臟組織中TGF-β1表達明顯增多，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL、FRM、FRH組大鼠腎臟組織中TGF-β1表

14、達明顯減少(P＜0.05)。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組表達明顯減少（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　結論:
　　1、本研究復制的糖尿病大鼠模型經過8周后存在腎臟的損害。
　　2、復榮通脈膠囊對糖代謝無影響。
　　3、復榮通脈膠囊能夠降低血尿素氮、肌酐的水平。
　　4、復榮通脈膠囊能夠抑制糖尿病大鼠血清MDA水平的升高，并且能夠抑制SOD水平的下降。