糖尿病大鼠骨折愈合過程中BMP-7、TGF-β1、b-FGF變化的實(shí)驗(yàn)觀察.pdf

1、糖尿病是以高血糖為特征的代謝紊亂,可影響骨、神經(jīng)、腎等多器官組織。臨床上糖尿病合并骨折患者很常見,延遲愈合或不愈合率及假關(guān)節(jié)形成率高,是臨床醫(yī)師面臨的棘手問題。隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的研究進(jìn)展,骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(Bone morphogenetic protein-7,BMP-7)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)堿性成纖維細(xì)胞因子(Basic fibroblast g

2、rowth factor,bFGF)等細(xì)胞因子在骨折愈合過程中的作用日益受到重視,但對(duì)糖尿病骨折愈合過程中其含量及作用尚缺乏深入統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。
　　 目的：通過測(cè)定糖尿病大鼠骨折后血清和骨折局部骨痂組織中BMP-7、TGF-β1、bFGF水平變化,探討影響糖尿病骨折愈合的分子生物學(xué)機(jī)制,以為發(fā)現(xiàn)糖尿病骨折愈合新的治療方法打下理論基礎(chǔ)。
　　 方法取清潔級(jí)wistar雄性大鼠70只,體重230-270 g,隨機(jī)分為兩組,每組

3、35只。一組為實(shí)驗(yàn)組,腹腔內(nèi)按60mg/kg注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ),破壞胰島細(xì)胞,基礎(chǔ)或隨機(jī)血糖>11.2mmol/L為糖尿病模型誘導(dǎo)成功；另一組為對(duì)照組,腹腔注射等量生理鹽水。無菌操作下用線鋸橫行鋸斷兩組大鼠左側(cè)脛骨,復(fù)位、縫合、外固定。分別于術(shù)后第1、2、3、4、6、8周取靜脈血,離心后保留血清；拍大鼠左下肢X線片觀察骨折愈合情況；取骨折斷端骨痂組織行HE染色光子顯微鏡下觀察、免疫組織化學(xué)檢測(cè)BMP-

4、7、TGF-β1、bFGF；酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)檢測(cè)血清BMP-7、TGF-β1、bFGF,兩組比較。利用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：(1)術(shù)后第1、2、3、4、6、8周行x線片,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠比較,骨痂生成量均減少。(2)HE染色、光子顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組骨形成滯后。(3)2周BMP-7免疫組化灰度值兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組176.96±4.79:對(duì)照組

5、139.22±6.40,P<0.01)3周TGF-β1免疫組化灰度值兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組189.59±2.76；對(duì)照組166.74±1.33,P<0.05)；3周bFGF免疫組化灰度值兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組161.20±4.57；對(duì)照組121.59±6.23,P<0.01)。(4)ELISA法檢測(cè)2周血清中BMP-7含量?jī)山M間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組1.77±0.23ng/ml；對(duì)照組3.46±0.24ng/ml,P<

6、0.01)；3周TGF-β1血清含量?jī)山M間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組12.05±1.56ng/ml；對(duì)照組17.48±0.56ng/ml,P<0.05)；3周bFGF血清含量?jī)山M間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(實(shí)驗(yàn)組2.53±0.22ng/ml；對(duì)照組4.25±0.24ng/ml,P<0.01)。
　　 結(jié)論：糖尿病大鼠骨折后血清及局部骨痂組織中BMP-7、TGF-β1、bFGF表達(dá)減少是導(dǎo)致糖尿病大鼠骨折延遲愈合的因?yàn)橹唬籘GF-β1、b