魚類非特異性免疫因子--干擾素的探索與研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文魚類非特異性免疫因子干擾素的探索與研究姓名：邵健忠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：錢凱先19981101浙江大學(xué)博士學(xué)位論文5開展了草魚干擾素體外誘生及組織細(xì)胞來源的研究，發(fā)現(xiàn)草魚干擾紊可以在體外通過誘導(dǎo)頭腎、脾臟、外周血和胸腺等免疫組織中的白細(xì)胞分泌產(chǎn)生，應(yīng)用血清干擾素抗體進(jìn)行中和反應(yīng)、斑點(diǎn)ELISA和Western印跡分析，證實(shí)體外誘生的白細(xì)胞干擾素與體內(nèi)誘生的血清干擾素是同一種物質(zhì)。同時(shí)應(yīng)用免疫熒

2、光標(biāo)記技術(shù)發(fā)現(xiàn)自細(xì)胞中產(chǎn)生干擾索的細(xì)胞主要是淋巴細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行了分離和體外誘導(dǎo)，初步證實(shí)T淋巴細(xì)胞是草魚干擾素的主要形成細(xì)胞。6對(duì)草魚干擾素的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了研究：(1)通過對(duì)草魚巨噬細(xì)胞的分離和培養(yǎng)、草魚巨噬細(xì)胞的活化指標(biāo)以及干擾素對(duì)巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用研究，建立了以Percoll不連續(xù)梯度離心技術(shù)為主的草魚巨噬細(xì)胞的分離純化方法確定了以氧自由基(027)、過氧化氫(H202)和酸性磷酸酶(ACP)為主的巨噬細(xì)胞

3、活化指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)草魚巨噬細(xì)胞經(jīng)合適濃度的干擾素處理后，其胞內(nèi)027和H202含量以及ACP活性都顯著增加。其吞噬殺菌能力也明顯提高，說明草魚干擾素能夠激活草魚巨噬細(xì)胞。(2)研究了草魚干擾紊對(duì)植物凝集桑(PHA)、刀豆球蛋白A(ConA)刺激引起的草魚外周血和頭腎T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及由葡萄球菌A蛋白(SPA)、細(xì)菌脂多糖(LPS)刺激引起的草魚外周血和頭腎B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的調(diào)節(jié)作用。發(fā)現(xiàn)干擾素對(duì)草魚T、B淋巴細(xì)胞無直接的促進(jìn)增殖和轉(zhuǎn)化作用，但

4、可以促進(jìn)由有絲分裂原刺激引起的T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化這種促進(jìn)作用與干擾紊的處理濃度有關(guān)系。(3)草魚干擾素對(duì)草魚抗體產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用研究發(fā)現(xiàn)。草魚干擾囊能夠影響草魚抗體的產(chǎn)生。這種調(diào)節(jié)作用與干擾索的注射劑量以及于擾寨與抗原注射的相對(duì)時(shí)間有關(guān)系，在注射抗原后24小時(shí)注射高濃度的干擾紊可以促進(jìn)草魚抗體的產(chǎn)生。7對(duì)草魚干擾素防治草魚出血病進(jìn)行了初步研究，結(jié)果證實(shí)草魚干擾紊對(duì)病毒性草魚出血病具有明顯的治療效果，能降低死亡率，延緩發(fā)病時(shí)間表現(xiàn)在注射干擾

5、素的試驗(yàn)組草魚感染病毒后的平均死亡率為5296％發(fā)绱高峰期為10天，而未注射干擾素的對(duì)照組草魚的平均死亡率為968％發(fā)病高峰期為5天，因此，經(jīng)干擾素治療后的草魚的發(fā)病死亡率下降了4384％，發(fā)病時(shí)間延緩了5天。目前對(duì)魚類干擾素尚缺乏深入系統(tǒng)的研究與認(rèn)識(shí)，特剮是有關(guān)魚類干擾素的分離純化方法、高效誘生規(guī)律、理化和生物學(xué)性質(zhì)、對(duì)病毒復(fù)制的抑制機(jī)理、組織細(xì)胞來源、免疫調(diào)節(jié)功能以及對(duì)魚類病害的防治作用，在國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道，因此論文在這些方砥所取得