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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
本研究采用高脂飲食建立單純性肥胖大鼠模型,以?shī)W利司他膠囊為西藥對(duì)照,分別觀察溫腎健脾化痰方對(duì)肥胖大鼠體重、Lee's指數(shù)、血脂、血清游離脂肪酸、肝臟及脂肪組織病理形態(tài)、脂肪因子瘦素(Leptin)、chemerin、產(chǎn)熱調(diào)節(jié)因子UCP3及AMPK-ACC信號(hào)通路中相關(guān)蛋白和基因表達(dá)的影響,探討溫腎健脾化痰方改善單純性肥胖大鼠脂代謝和瘦素抵抗的可能作用機(jī)制。
方法:
SPF級(jí)雄性SD大鼠80只(體重1
2、20±20g),隨機(jī)抽取10只作為正常組,給予普通飼料喂養(yǎng);其余70只大鼠采用高脂飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)8周末,篩選出體重超過(guò)正常組大鼠平均體重20%者作為單純性肥胖大鼠模型。按照隨機(jī)數(shù)字表將造模成功的肥胖大鼠分為5組:肥胖模型組(即模型組)、西藥奧利司他治療組(即西藥組)、溫腎健脾化痰方低劑量組(即低劑量組)、溫腎健脾化痰方中劑量組(即中劑量組)、溫腎健脾化痰方高劑量組(即高劑量組),每組大鼠各10只。于第9周開(kāi)始灌胃,給藥量如下,低劑量組為
3、3.47g/(kg·d)、中劑量組為6.93g/(kg·d)、高劑量組為13.86g/(kg·d)、西藥組為37.8 mg/(kg·d),正常組和模型組以等體積的蒸餾水灌胃,各組按lml/100g的標(biāo)準(zhǔn)灌胃,連續(xù)給藥6周。實(shí)驗(yàn)期間,每周測(cè)量?jī)纱未笫蟮捏w重及體長(zhǎng)。至實(shí)驗(yàn)第14周末,從腹主動(dòng)脈取血,分離血清,檢測(cè)各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及血清游離脂肪酸水平;ELISA法測(cè)定血清Leptin及肝臟chemer
4、in水平;切取少許大鼠肝臟組織和腹部脂肪組織,光鏡下觀察其肝臟及脂肪組織病理形態(tài);采用Western blot法檢測(cè)各組大鼠肝臟組織OB-R、AMPK、P-AMPK、ACC、CPT1的蛋白表達(dá)水平及骨骼肌中UCP3的蛋白表達(dá)水平,采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠肝臟OB-R、AMPK、ACC、CPT1mRNA表達(dá)量及骨骼肌中UCP3 mRNA表達(dá)量。
結(jié)果:
1.溫腎健脾化痰方對(duì)單純性肥胖大鼠脂代謝的影響:
5、①高脂喂養(yǎng)8周后,造模組體重、Lee's指數(shù)與正常組比較均顯著增加(p<0.01),提示單純性肥胖大鼠造模成功;②溫腎健脾化痰方能降低單純性肥胖大鼠體重及Lee's指數(shù),用藥6周末,高、中劑量組體重與模型組相比均有顯著性差異(p<0.01),高劑量組Lee's指數(shù)與模型組比較有顯著性差異(p<0.01);③與模型組比較,高、中劑量組血清TG、TC、LDL-C、FFA的含量顯著降低(p<0.01),且低劑量組TG水平相比模型組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
6、(p<0.05),高劑量組HDL-C的含量較模型組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
2.溫腎健脾化痰方對(duì)單純性肥胖大鼠脂肪及肝臟組織病理形態(tài)的影響:①脂肪組織病理改變:中、高劑量組大鼠脂肪細(xì)胞面積較模型組減小,單位視野內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)目增多;②肝臟組織病理改變:與模型組比較,高劑量組大鼠肝細(xì)胞排列較為均勻有序,胞漿內(nèi)脂滴變小,細(xì)胞水腫及細(xì)胞脂肪變性有明顯好轉(zhuǎn),存在少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
3.溫腎健脾化痰方對(duì)單純性肥胖大鼠脂肪因
7、子Leptin、chemerin的影響:①與空白組相比,模型組血清Leptin顯著升高(p<0.01),高、中劑量組較模型組血清Leptin均降低(p<0.01,p<0.05);②與正常組比較,模型組血清及肝臟chemerin明顯升高(p<0.01),高、中劑量組血清及肝臟chemerin含量較模型組均下降(p<0.01,p<0.05)。
4.溫腎健脾化痰方對(duì)單純性肥胖大鼠骨骼肌組織UCP3的影響:模型組較正常組大鼠骨骼肌的U
8、CP3mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低(p<0.01);高、中劑量組較模型組大鼠骨骼肌的UCP3mRNA和蛋白表達(dá)水平升高(p<0.01)。
5.溫腎健脾化痰方對(duì)單純性肥胖大鼠肝臟AMPK-ACC-CPT1通路的影響:①模型組大鼠較正常組大鼠肝臟OB-R mRNA及蛋白表達(dá)均顯著降低(p<0.01),與模型組比較,高、中劑量組大鼠肝臟OB-R mRNA及蛋白表達(dá)升高(p<0.05);②與正常組比較,模型組大鼠肝臟AMPK、p-AM
9、PK、CPT1的蛋白含量顯著降低(p<0.01),模型組大鼠肝臟AMPKmRNA和CPT1 mRNA表達(dá)也降低(p<0.01);與模型組相比,高劑量組大鼠肝臟AMPK蛋白表達(dá)量增加(p<0.05),高、中劑量組大鼠肝臟p-AMPK蛋白表達(dá)量增高(p<0.01,p<0.05);高、中劑量組大鼠肝臟CPT1的蛋白含量升高(p<0.05),高、中劑量組大鼠肝臟AMPKmRNA和CPT1 mRNA表達(dá)量也增加(p<0.01,p<0.05);③模
10、型組較正常組大鼠肝臟ACC蛋白和基因表達(dá)水平升高(p<0.01),與模型組相比,高、中劑量組大鼠肝臟的ACC mRNA及蛋白表達(dá)水平均降低(p<0.05)。
結(jié)論:
溫腎健脾化痰方的減肥作用機(jī)制可能是通過(guò)增加肝臟OB-R的蛋白表達(dá)量,增加OB-R與Leptin的結(jié)合力,提高瘦素敏感性,從而激活肝臟Leptin介導(dǎo)的AMPK-ACC-CPT1信號(hào)通路,并通過(guò)增加解偶聯(lián)作用提高基礎(chǔ)代謝率,促進(jìn)脂肪酸氧化分解、降低FFA水
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