HBeAg陰性慢乙肝患者血清N-糖組學(xué)改變及補(bǔ)腎祛邪法抗肝纖維化臨床研究.pdf

1、背景：
　　慢性乙型肝炎(CHB)是世界三大頑癥之一，全球乙肝攜帶者約億人。就群體而言，HBeAg陰性CHB患者纖維化分期高于HBeAg陽(yáng)性CHB患者，所以前者進(jìn)展為肝硬化的機(jī)會(huì)更大，且發(fā)生臨床失代償和肝細(xì)胞癌（HCC）的機(jī)會(huì)更多，所以針對(duì)作為其主要病理轉(zhuǎn)歸期的早期肝纖維化及時(shí)而準(zhǔn)確的診斷對(duì)控制、治療疾病至關(guān)重要。目前肝纖維化診斷的―金標(biāo)準(zhǔn)‖仍然是肝穿刺活檢，但由于肝活檢的諸多缺點(diǎn)，臨床一直在尋找更好的無(wú)創(chuàng)檢測(cè)手段。隨著糖組學(xué)的蓬

2、勃發(fā)展，其在肝病的發(fā)病機(jī)制、早期診斷和治療中的應(yīng)用取得了一定進(jìn)展，為肝病的診斷研究提供了新的思路。在肝病特別是肝纖維化情況下，N-糖組學(xué)的檢測(cè)有望成為肝病早期無(wú)創(chuàng)性診斷的依據(jù)，可能為臨床的早期診斷提供有效手段。
　　本課題組前期研究結(jié)果表明，補(bǔ)腎祛邪法于 HBeAg陰性 CHB不僅可顯著改善中醫(yī)證候，而且能抗肝損傷、促進(jìn)肝功能的恢復(fù)，抑制 HBV復(fù)制，阻止或延緩 HBeAg陰性 CHB患者的病程進(jìn)展。因此，有必要結(jié)合臨床療效和檢測(cè)

3、指標(biāo)，通過(guò)分析干預(yù)前后血清 N-糖組水平的改變，揭示補(bǔ)腎祛邪法的療效機(jī)制。
　　目的：
　　1．運(yùn)用糖組學(xué)鑒定與HBeAg陰性CHB肝纖維化相關(guān)生物標(biāo)志物，尋找肝病早期無(wú)創(chuàng)性診斷方法。
　　2．從N-糖組學(xué)角度探討―肝腎同源‖理論及補(bǔ)腎祛邪法干預(yù)的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1．本研究從N-糖組分析入手，評(píng)估N-糖鏈以及N-糖鏈相關(guān)的多指標(biāo)聯(lián)合診斷模型在肝纖維化鑒別診斷及隨訪中的價(jià)值。采用 DSA-FACE

4、的方法，檢測(cè)了174例研究對(duì)象(144例HBeAg陰性CHB肝纖維化患者和30例正常對(duì)照)的血清 N-糖組圖譜，比較肝纖維化不同程度下其特征性改變，并分析各峰值的差異。應(yīng)用 logistics回歸法建立了基于 N-糖標(biāo)志物的多參數(shù)聯(lián)合診斷模型，并用ROC曲線評(píng)估各指標(biāo)的診斷效力。
　　2．納入120例HBeAg陰性CHB患者，用隨機(jī)數(shù)字表分為對(duì)照組、研究組，研究組口服―地五養(yǎng)肝方‖1包/次，2次/日（早晚溫開(kāi)水沖服），同時(shí)口服恩替

5、卡韋0.5毫克/次，1次/日（空腹）；對(duì)照組予中藥安慰劑口服，同時(shí)口服恩替卡韋0.5毫克/次，1次/日（空腹）。并另選同期健康人30例作為正常組。療程為36周。觀察干預(yù)前后HBsAg、HBV DNA；肝腎功能、血脂、血清肝纖四項(xiàng)（Ⅳ-C、PCⅢ、LN、HA）；血清中 N-糖組各峰值；并于治療前后分別進(jìn)行 CLDQ及 SF-36量表分值測(cè)定。應(yīng)用配對(duì)t檢驗(yàn)或獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1．兩個(gè)N-糖鏈結(jié)構(gòu)（p

6、eak4，Peak8）可作為區(qū)分HBeAg陰性CHB肝纖維化程度的特異性診斷標(biāo)志物，lg（p4/p8）在鑒別早、晚肝纖維化時(shí)，具有一定診斷效力。并建立N-糖聯(lián)合模型FtestA和N-糖與HA的聯(lián)合診斷模型FtestB。
　　FtestA模型判別HBeAg陰性CHB患者顯著肝纖維化(S＞2)的受試者工作特征曲線下面積（AUC）為0.85。以0.51作為顯著肝纖維化的界值，其敏感性、陰性預(yù)測(cè)值分別為77％和86%；同時(shí)FtestB模型

7、判斷HBeAg陰性CHB患者顯著肝纖維化(S＞2)的受試者工作特征曲線下面積（AUC）為0.87。以0.54作為除外顯著肝纖維化的界值，其敏感性、陰性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確率分別為74%和84%。
　　2．兩組慢性乙型肝炎患者治療前的基線特征具有良好的可比性。補(bǔ)腎祛邪法干預(yù)36周后：①HBV DNA陰轉(zhuǎn)情況：研究組HBV DNA陰轉(zhuǎn)率與對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）；②肝功能及凝血功能：兩組治療后ALT、AST水平較治療前均明顯下降（P＜

8、0.01），且研究組治療后ALT、AST水平較對(duì)照組治療后明顯降低（P＜0.01）。兩組治療后 PT較治療前有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；③肝纖維化指標(biāo)：兩組治療后Ⅳ-C、PCⅢ、LN、HA水平較治療前均明顯下降（P＜0.01），且研究組治療后Ⅳ-C、PCⅢ、LN、HA水平低于同期對(duì)照組（P＜0.01）；④生存質(zhì)量：研究組患者 CLDQ及 SF-36量表的各項(xiàng)評(píng)分在治療結(jié)束后均有明顯提高，差異具有顯著性意義(P＜0.05

9、），且比對(duì)照組各項(xiàng)量表積分也有顯著提高(P＜0.05）；⑤N-糖組改變：兩組治療后 peak1、peak4較前明顯降低，peak11較前明顯升高，差異具有顯著性意義(P＜0.05），且peak1和peak11治療后兩組有明顯差異（p＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．N-糖鏈lg（p4/p8）有望成為新的HBeAg陰性CHB肝纖維化程度的特異性診斷標(biāo)志物；N-糖標(biāo)志物與HA聯(lián)合診斷模型可顯著提高的診斷效力，并可用于進(jìn)展的動(dòng)態(tài)