A20在幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎中的作用機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在檢測H.pylori感染組織及細胞中A20及miR-29a-3p的表達差異，明確在H.pylori感染中H.pylori、miR-29a-3p、A20三者間的作用關(guān)系，探索A20在H.pylori感染相關(guān)性胃炎發(fā)生發(fā)展中的作用機制，有望為臨床H.pylori感染相關(guān)性胃炎的分子診斷及靶向治療提供新的依據(jù)和思路。
　　方法：
　　采用IHC及qRT-PCR的方法檢測H.pylori感染胃黏膜組織中A

2、20、miR-29a-3p的表達，Western blot及qRT-PCR分析H.pylori感染細胞模型中A20、miR-29a-3p的表達。運用生物信息學軟件預測miR-29a-3p的靶基因，通過Luciferase和Western blot驗證miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p mimics轉(zhuǎn)染細胞后再感染 H.pylori， Western blot分析H.pylori、A20、miR-29a-3p三者間的作用關(guān)

3、系。采用基因干擾、過表達技術(shù)分別沉默和過表達A20，Western blot檢測phosphorylated NF-κB p65及NF-κB p65的表達，免疫熒光分析NF-κB p65核轉(zhuǎn)位，qRT-PCR和ELISA分析NF-κB下游炎癥因子IL-6和IL-8的表達。同時將基因干擾和H.pylori感染相結(jié)合，初步探索A20在H.pylori感染相關(guān)性胃炎中的作用機制。
　　結(jié)果：
　　相對于H.pylori感染陰性的正

4、常胃黏膜或輕度胃炎組織，A20在H.pylori感染陽性的胃炎或潰瘍組織中表達顯著降低，體外H.pylori感染細胞模型中顯示了一致的結(jié)果，并且A20表達降低具有H.pylori感染時間和濃度依賴性。而miR-29a-3p在H.pylori感染陽性的胃炎或潰瘍組織中表達上調(diào)，在體外H.pylori感染細胞模型中miR-29a-3p表達也增加且具有H.pylori感染濃度依賴性。A20被預測驗證為miR-29a-3p的靶基因，在H.pyl

5、ori感染中H.pylori通過上調(diào)miR-29a-3p表達進而使A20表達水平降低。過表達A20能增強phosphorylated NF-κB p65的表達及NF-κB p65核轉(zhuǎn)位，同時增加NF-κB下游炎癥因子IL-6和IL-8的表達，而沉默A20表達后，則能相應地抑制NF-κB p65的活化及其下游炎癥因子的表達。相對于H.pylori感染組，IL-6和IL-8在A20沉默后再感染H.pylori組中的表達水平降低，表明沉默A2

6、0能抑制H.pylori感染所誘導的炎癥反應。
　　結(jié)論：
　　A20在H.pylori感染組織及細胞中表達降低，而miR-29a-3p在H.pylori感染組織及細胞中表達增加，A20是miR-29a-3p的直接靶基因，在H.pylori感染中H.pylori通過上調(diào)miR-29a-3p表達進而使A20表達水平降低。A20表達降低能抑制NF-κB活化及其下游炎癥因子的表達，提示A20表達下調(diào)可能在H.pylori感染中起到