陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨組織Sox9、Col2al的表達(dá)研究.pdf

1、目的：通過檢測膝關(guān)節(jié)軟骨 Sox9、Col2al基因在陽虛質(zhì)與平和質(zhì)兩者之間的表達(dá)水平，從分子、蛋白水平分析中醫(yī)體質(zhì)類型中陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)Sox9、Col2al基因表達(dá)，比較膝骨性關(guān)節(jié)炎陽虛質(zhì)與平和體質(zhì)的Sox9及Col2al基因水平差異，探討膝骨性關(guān)節(jié)炎中 Sox9、Col2al與中醫(yī)體質(zhì)的內(nèi)在聯(lián)系和規(guī)律，從中醫(yī)體質(zhì)學(xué)角度研究膝骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律與人體體質(zhì)因素的相關(guān)性，深刻認(rèn)識(shí)陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病本質(zhì)，為中醫(yī)體質(zhì)

2、學(xué)說預(yù)防和治療陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎提供理論參考。
　　方法：2012年10月20日—2014年12月27日，對(duì)甘肅省中醫(yī)院關(guān)節(jié)骨科門診及住院部確診為膝骨性關(guān)節(jié)炎的患者進(jìn)行中醫(yī)體質(zhì)問卷調(diào)查，同時(shí)調(diào)查、收集非膝骨性關(guān)節(jié)炎正常人群的一般資料。所有調(diào)查、收集均按統(tǒng)一設(shè)計(jì)的研究病例報(bào)告表逐項(xiàng)進(jìn)行問卷調(diào)查。并于2014年2月1日—2014年12月28日，對(duì)甘肅省中醫(yī)院關(guān)節(jié)骨科住院部確診為膝骨性關(guān)節(jié)炎并做膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的患者，在手術(shù)過程中，快速、無

3、菌采集患者膝關(guān)節(jié)外側(cè)軟骨標(biāo)本。取材均經(jīng)患者及其親屬的知情同意，并獲得甘肅省中醫(yī)院倫理委員會(huì)的同意和認(rèn)可。標(biāo)本離體后，分別留取與病理取材部位相一致處的關(guān)節(jié)軟骨組織，經(jīng)玻璃化法后以最快的速度投入液氮中保存并統(tǒng)一存放于-80℃冰箱。標(biāo)本取出后，對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎患者進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后確定高發(fā)體質(zhì)（陽虛質(zhì)）與平和質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎患者及陽虛質(zhì)非膝骨性關(guān)節(jié)炎患者（對(duì)照組）標(biāo)本 HE染色，在顯微鏡下觀察不同體質(zhì) KOA患者軟骨的病理改變，采取免疫組化及Real

4、-Time RT-PCR的方法檢測Sox9基因、Col2al在陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎患者膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 mRNA及蛋白水平的表達(dá)，分析患者體內(nèi)相關(guān)蛋白水平高表達(dá)與中醫(yī)體質(zhì)之間的關(guān)系，全部臨床資料建成EXCEL數(shù)據(jù)庫，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0軟件。
　　結(jié)果：在對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)在不同體質(zhì)的KOA患者中，陽虛質(zhì)KOA患者中軟骨內(nèi)細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞聚集成團(tuán)或者局部退化消失，Sox9在軟骨細(xì)胞核中表達(dá)，Col2al在細(xì)胞外基質(zhì)中表

5、達(dá)，在平和質(zhì)KOA、陽虛質(zhì)非KOA患者軟骨細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，在陽虛質(zhì) KOA相對(duì)平和體質(zhì)表達(dá)比較低，兩者的表達(dá)均有顯著差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：膝骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的體質(zhì)危險(xiǎn)因素主要為陽虛質(zhì)。在分子表達(dá)水平Sox9及Col2al均呈現(xiàn)低表達(dá)，其與中醫(yī)體質(zhì)存在一定的內(nèi)在相關(guān)性，說明體質(zhì)因素是誘發(fā)膝骨性關(guān)節(jié)炎的高危因素，因人的體質(zhì)是相對(duì)恒定的，某一疾病的誘發(fā)是具有時(shí)間性的，故陽虛質(zhì)是膝骨性關(guān)節(jié)炎中誘導(dǎo)Sox9及Col2al低表