陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨中PKC、β-Catenin、MMP-13表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：應(yīng)用臨床流行病學(xué)方法調(diào)查膝骨性關(guān)節(jié)炎（KOA）中醫(yī)體質(zhì)類型分布特點(diǎn)及相關(guān)發(fā)病因素，在確定KOA中高發(fā)體質(zhì)類型為陽虛質(zhì)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組化和實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測方法從分子水平探討陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎與蛋白激酶C(PKC)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質(zhì)金屬酶13(MMP13)表達(dá)之間的相關(guān)性。深入分析西北地區(qū)陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎患者的相關(guān)發(fā)病機(jī)制，為陽虛質(zhì)KOA的辨析提供客觀依據(jù)，為中醫(yī)藥辨體防治該

2、病提供新的思路和治療靶點(diǎn)。
　　方法：應(yīng)用臨床流行病學(xué)方法，參照《中醫(yī)體質(zhì)分類與判定》標(biāo)準(zhǔn)，制訂“陽虛質(zhì)膝骨性關(guān)節(jié)炎與Wnt/β-Catenin信號通路調(diào)體研究”統(tǒng)一設(shè)計(jì)的研究調(diào)查表。判定KOA患者中醫(yī)體質(zhì)類型，收集關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本，建立KOA患者中醫(yī)體質(zhì)數(shù)據(jù)庫。在數(shù)據(jù)庫中隨機(jī)選取KOA病例組共20例，其中非陽虛質(zhì)KOA10例，陽虛質(zhì)KOA10例；正常非KOA患者對照組10例。應(yīng)用文獻(xiàn)循證方法選擇在KOA的發(fā)病過程中，與關(guān)節(jié)軟骨代謝密

3、切相關(guān)的基因（蛋白激酶C、β-連環(huán)蛋白、基質(zhì)金屬酶13）。利用分子生物學(xué)研究，采用免疫組化及RT-PCR方法，檢測三種基因在不同組別中的表達(dá)。分析KOA與健康對照組、陽虛質(zhì)KOA與健康對照組、非陽虛質(zhì)KOA與陽虛質(zhì)KOA、非陽虛質(zhì)KOA與健康對照組中三種基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)在對406例膝骨性關(guān)節(jié)炎調(diào)查中發(fā)現(xiàn)陽虛質(zhì)、氣虛質(zhì)、氣郁質(zhì)是膝骨性關(guān)節(jié)炎患者的常見發(fā)病體質(zhì)，其中陽虛質(zhì)164例，占40.39％，氣虛質(zhì)117例，占2

4、8.82%，氣郁質(zhì)65例，占16.01%。(2)免疫組化研究顯示：PKC、MMP-13在正常關(guān)節(jié)軟骨及陽虛質(zhì)KOA與非陽虛質(zhì)KOA中均有表達(dá)，表達(dá)主要位于細(xì)胞漿及細(xì)胞核內(nèi)，組間進(jìn)行兩兩比較，均具有明顯差異（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；β-catenin在正常對照組關(guān)節(jié)軟骨中表達(dá)為陰性，在陽虛質(zhì)KOA組與非陽虛質(zhì)KOA組均有表達(dá)，表達(dá)主要位于細(xì)胞核內(nèi)，病例組兩者比較，無明顯差異（P＞0.05），無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3) RT-PCR研究顯

5、示：PKC、MMP-13基因在正常對照組與KOA病例組關(guān)節(jié)軟骨組織中的表達(dá)進(jìn)行比較，均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；PKC、MMP-13基因在陽虛質(zhì)病例組、非陽虛質(zhì)病例組與對照組進(jìn)行兩兩比較（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。β-catenin基因在正常對照組中無明顯表達(dá)，與KOA病例組關(guān)節(jié)軟骨組織中的表達(dá)進(jìn)行比較，具有明顯差異；β-catenin基因在陽虛質(zhì)病例組、非陽虛質(zhì)病例組之間進(jìn)行比較（P＞0.05），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。