陽虛質膝骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨中PKC、β-Catenin、MMP-13表達的相關性研究.pdf

1、目的：應用臨床流行病學方法調查膝骨性關節(jié)炎（KOA）中醫(yī)體質類型分布特點及相關發(fā)病因素，在確定KOA中高發(fā)體質類型為陽虛質的基礎上，應用免疫組化和實時熒光定量聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測方法從分子水平探討陽虛質膝骨性關節(jié)炎與蛋白激酶C(PKC)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、基質金屬酶13(MMP13)表達之間的相關性。深入分析西北地區(qū)陽虛質膝骨性關節(jié)炎患者的相關發(fā)病機制，為陽虛質KOA的辨析提供客觀依據，為中醫(yī)藥辨體防治該

2、病提供新的思路和治療靶點。
　　方法：應用臨床流行病學方法，參照《中醫(yī)體質分類與判定》標準，制訂“陽虛質膝骨性關節(jié)炎與Wnt/β-Catenin信號通路調體研究”統(tǒng)一設計的研究調查表。判定KOA患者中醫(yī)體質類型，收集關節(jié)軟骨標本，建立KOA患者中醫(yī)體質數據庫。在數據庫中隨機選取KOA病例組共20例，其中非陽虛質KOA10例，陽虛質KOA10例；正常非KOA患者對照組10例。應用文獻循證方法選擇在KOA的發(fā)病過程中，與關節(jié)軟骨代謝密

3、切相關的基因（蛋白激酶C、β-連環(huán)蛋白、基質金屬酶13）。利用分子生物學研究，采用免疫組化及RT-PCR方法，檢測三種基因在不同組別中的表達。分析KOA與健康對照組、陽虛質KOA與健康對照組、非陽虛質KOA與陽虛質KOA、非陽虛質KOA與健康對照組中三種基因的表達情況。
　　結果：(1)在對406例膝骨性關節(jié)炎調查中發(fā)現(xiàn)陽虛質、氣虛質、氣郁質是膝骨性關節(jié)炎患者的常見發(fā)病體質，其中陽虛質164例，占40.39％，氣虛質117例，占2

4、8.82%，氣郁質65例，占16.01%。(2)免疫組化研究顯示：PKC、MMP-13在正常關節(jié)軟骨及陽虛質KOA與非陽虛質KOA中均有表達，表達主要位于細胞漿及細胞核內，組間進行兩兩比較，均具有明顯差異（P＜0.05），具有統(tǒng)計學意義；β-catenin在正常對照組關節(jié)軟骨中表達為陰性，在陽虛質KOA組與非陽虛質KOA組均有表達，表達主要位于細胞核內，病例組兩者比較，無明顯差異（P＞0.05），無統(tǒng)計學意義。(3) RT-PCR研究顯

5、示：PKC、MMP-13基因在正常對照組與KOA病例組關節(jié)軟骨組織中的表達進行比較，均具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；PKC、MMP-13基因在陽虛質病例組、非陽虛質病例組與對照組進行兩兩比較（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計學意義。β-catenin基因在正常對照組中無明顯表達，與KOA病例組關節(jié)軟骨組織中的表達進行比較，具有明顯差異；β-catenin基因在陽虛質病例組、非陽虛質病例組之間進行比較（P＞0.05），差異無統(tǒng)計學意義。