藏紫菀總黃酮的提取純化及其對(duì)減壓缺氧小鼠的保護(hù)作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究藏紫菀中總黃酮活性成分的提取與純化工藝；探討藏紫菀總黃酮對(duì)模擬急性高原減壓缺氧小鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法:采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選藏紫菀總黃酮的最佳提取工藝；采用大孔吸附樹脂優(yōu)選藏紫菀總黃酮的最佳純化工藝；采用常壓密閉缺氧耐力實(shí)驗(yàn)和急性減壓缺氧耐受力實(shí)驗(yàn)探討藏紫菀總黃酮的抗缺氧作用，從不同劑量組中篩選出最佳劑量；采用低壓低氧動(dòng)物實(shí)驗(yàn)艙，模擬高原缺氧環(huán)境，造成小鼠高原損傷模型，通過HE染色觀察小鼠腦和心組織的病理變化，同

2、時(shí)檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo)，考察藏紫菀總黃酮的抗急性高原缺氧損傷作用，并通過western blot蛋白分析法，初步確定其作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.藏紫菀總黃酮的最佳提取工藝為：藏紫菀藥材中加入12倍量的水，加熱回流提取2次，每次提取2h，出膏率可以達(dá)到24.58％，總黃酮含量可以達(dá)到29.7%。
　　2.通過靜態(tài)和動(dòng)態(tài)吸附行為考察，從10種樹脂中優(yōu)選出解吸率最佳的LX-60樹脂進(jìn)行純化工藝研究，最終確定藏紫菀總黃酮的最

3、佳純化工藝為：上樣質(zhì)量濃度4.124mg/mL，上樣流速為1ml/min，靜置吸附15min，沖洗用水2BV，洗脫劑選用60%乙醇，4BV洗脫，洗脫流速1ml/min，以總黃酮含量為指標(biāo)，確定徑高比為2.5:8。
　　3.在小鼠常壓密閉缺氧耐力實(shí)驗(yàn)和急性減壓缺氧耐受力實(shí)驗(yàn)中，與未給藥小鼠的存活時(shí)間和死亡率相比較，口服藏紫菀總黃酮小鼠存活時(shí)間延長(zhǎng)和死亡率降低。其中高劑量組的存活時(shí)間可延長(zhǎng)32%，最佳給藥劑量為500mg/kg。

4、>　　4.小鼠減壓缺氧實(shí)驗(yàn)中，與未缺氧小鼠腦和心肌組織中的指標(biāo)比較，減壓缺氧小鼠腦和心肌組織中MDA，LD，LDH，H2O2和CK均顯著性升高；與缺氧模型組比較，藏紫菀總黃酮組腦和心肌組織中MDA，LDH，H2O2和CK均顯著性降低。
　　5.小鼠減壓缺氧實(shí)驗(yàn)中，與未缺氧小鼠腦和心肌組織中的指標(biāo)比較，減壓缺氧小鼠腦和心肌組織中CAT，SOD，GSH和GSH-PX有顯著性降低，與缺氧模型組比較，藏紫菀總黃酮組腦和心肌組織中CAT，S

5、OD，GSH和GSH-PX有顯著性升高。
　　6.小鼠減壓缺氧實(shí)驗(yàn)中，與正常組比較，缺氧模型組腦組織中HIF-1α、VEGF、Nrf2和caspase3有顯著性升高，SOD和bcl2/bax有顯著性降低；與缺氧模型組比較，藏紫菀總黃酮組腦組織中HIF-1α、VEGF和caspase3有顯著性降低， Nrf2、SOD和bcl2/bax有顯著性升高。
　　結(jié)論：
　　1.采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選的藏紫菀總黃酮提取工藝，制定了確切

6、有效的提取方法，工藝簡(jiǎn)單可行。
　　2.采用大孔吸附樹脂優(yōu)選的藏紫菀總黃酮純化工藝，可極大地提高總黃酮的含量，可適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
　　3.小鼠常壓密閉缺氧耐力實(shí)驗(yàn)和急性減壓缺氧耐受力實(shí)驗(yàn)說明藏紫菀總黃酮具有良好的抗缺氧活性。
　　4.小鼠減壓缺氧實(shí)驗(yàn)表明：藏紫菀總黃酮可以降低缺氧誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化、無氧糖酵解和氧自由基；提高抗氧化酶活力，增加機(jī)體抗氧化能力，抵御機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷。
　　5.通過對(duì)抗缺氧，