甘氨酸對缺氧和燒傷大鼠心肌的保護作用及其機制研究.pdf

1、嚴重?zé)齻缙诎l(fā)生的“休克心”，是誘發(fā)或加重?zé)齻菘?，?dǎo)致其他組織器官缺血缺氧損害和功能障礙的重要原因，因此在燒傷早期實施有效的心肌保護措施對糾正休克、防治組織器官缺血缺氧損害具有重要意義。近年來的研究提出，游離的甘氨酸具有顯著的細胞保護作用。甘氨酸可明顯減輕缺血、再灌注所致的骨骼肌損傷；減輕細胞因子的釋放及鈣超載和氧自由基的產(chǎn)生；還能減輕內(nèi)毒素血癥，降低內(nèi)毒素血癥大鼠的死亡率。但甘氨酸是否對燒傷后心肌細胞具有保護作用及其作用機制尚未見報

2、道。本研究通過建立體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞缺氧模型和大鼠30％燒傷模型，從心肌的形態(tài)學(xué)、酶學(xué)等一系列指標(biāo)的改變，以明確甘氨酸對缺氧和燒傷早期大鼠心肌損害的保護作用。然后通過觀察體外培養(yǎng)的心肌細胞鈣離子、膜電位及其受體的變化，探討其保護作用機理。 材料與方法：一、體外實驗1.模型與分組：離體培養(yǎng)的SD乳鼠心肌細胞，分為常氧組(N)、常氧加甘氨酸組(NG)、缺氧組(1％氧濃度)(H)、甘氨酸處理加缺氧組(GH組)、甘氨酸加anti-G

3、lyRα1多克隆抗體阻斷劑加缺氧組甘氨酸加甘氨酸受體激動劑Taurine加缺氧組(GHT)。 2.觀測指標(biāo)和方法(1)缺氧1、3、6、12、24h后，取細胞培養(yǎng)上清液，紫外分光光度計測LDH、CK含量，缺氧6h后心肌細胞存活率采用臺盼藍排斥法。 (2)離體培養(yǎng)的大鼠心肌細胞，采用特異熒光探針，在激光共聚焦下檢測缺氧6h后心肌細胞游離鈣及膜電位的變化。 (3)心肌細胞甘氨酸受體α1亞基采用免疫組織化學(xué)熒光染色法檢測

4、。 二、動物實驗1.模型與分組：采用SD大鼠致成30％TBSAⅢ°燙傷模型，試驗分為正常組(N)、5燒傷組(B)和甘氨酸處理組(G)。 2.觀測指標(biāo)和方法(1)HE染色觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)變化。(2)常規(guī)方法檢測血清中LDH、CK含量。(3)ELISA檢測血清中TnI含量。 主要結(jié)果：一、體外實驗1.缺氧1、3、6、12、24h后，心肌細胞損傷逐漸加重，其釋放的LDH逐漸增高，而在三種不同濃度的甘氨酸處理后，缺

5、氧心肌細胞釋放LDH明顯減少；并且甘氨酸濃度越高，心肌細胞釋放LDH越少，即呈現(xiàn)濃度依賴性。 2.缺氧1、3、6、12、24h后，心肌細胞上清液中CK逐漸增高，在加入甘氨酸可以明顯減少缺氧后心肌細胞CK釋放。 3.缺氧6h后心肌細胞存活率明顯下降，甘氨酸處理組心肌細胞的存活率顯著提高(P＜0.01)。 4.常氧和缺氧心肌細胞免疫組織化學(xué)熒光染色，在熒光倒置顯微鏡下觀察，可見心肌細胞膜上存在GlyRα1亞基。

6、 5.心肌細胞鈣離子的測定：缺氧6h后心肌細胞發(fā)生明顯的鈣超載，加入甘氨酸后鈣超載明顯減輕，而加入anti-GlyRα1阻斷甘氨酸受體α1亞基后缺氧細胞鈣超載又明顯加重；在加入甘氨酸受體激動劑Taurine后鈣超載又明顯減輕。 6.心肌細胞缺氧6h后，膜電位熒光強度較正常心肌細胞明顯降低；加入甘氨酸后膜電位熒光強度顯著增高，提示缺氧后心肌細胞膜發(fā)生明顯的去極化，加入甘氨酸可使心肌細胞去極化明顯減輕。 二、動物實驗1.燙

7、傷后3h開始大鼠血清中LDH、CK均明顯升高，分別在傷后6、12h達高峰，后逐漸回落。而甘氨酸處理組與燒傷組比較，血清中LDH、CK含量明顯降低(P＜0.01) 2.燙傷后1h，TnI即明顯升高，傷后6h達高峰，后漸回落。而甘氨酸處理組血清TnI與燒傷組相比明顯降低。 3.心肌組織病理觀察，光鏡下可見甘氨酸處理組大鼠心肌組織病理改變明顯減輕。 結(jié)論：本研究體外試驗與動物試驗的結(jié)果表明，甘氨酸對體外培養(yǎng)的乳鼠缺氧心