不同來源金黃色葡萄球菌耐藥毒力相關(guān)分子特征研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)簡(jiǎn)稱金葡菌，是一種機(jī)會(huì)性致病菌，可以引起多種疾病，同時(shí)也是導(dǎo)致人類食物中毒的重要病原菌，引起的食物中毒占世界第三位。由于抗生素的不合理使用，造成金葡菌耐藥菌株的出現(xiàn)，給人類健康帶來巨大的影響，引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。根據(jù)金葡菌對(duì)甲氧西林的耐藥情況，可以分為耐甲氧西林金葡菌(Methicillin-resistant Staphylococeus aureus，MRSA)和甲

2、氧西林敏感金葡菌(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus，MSSA)。金葡菌的致病性和其含有的毒力因子有關(guān)。不同地區(qū)、不同來源金葡菌的耐藥情況、流行菌株不同，研究菌株流行情況可以為金葡菌的預(yù)防提供參考。
　　目的：
　　1.了解不同種類食品中含有的金葡菌耐藥特點(diǎn)及毒力基因攜帶情況，比較食品來源與醫(yī)院來源的菌株在耐藥特點(diǎn)與毒力基因分布方面的差異。
　　2.比較MRSA與MS

3、SA菌株耐藥譜、耐藥基因與毒力基因攜帶情況，分析MRSA菌株的SCCmec分型。
　　3.了解金葡菌的agr分型，比較不同型別攜帶毒力基因的差異。
　　4.獲得不同來源金葡菌的spa流行型別，了解本地區(qū)金葡菌的流行特征。
　　方法
　　1.根據(jù)最低抑菌濃度（MIC）對(duì)不同來源金葡菌進(jìn)行臨床常用8種藥物的藥敏檢測(cè)。
　　2.設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR方法擴(kuò)增不同來源金葡菌的耐藥基因與毒力基因。
　　3.多重P

4、CR對(duì)MRSA菌株進(jìn)行SCCmec分型。
　　4.多重PCR對(duì)金葡菌進(jìn)行agr分型。
　　5.引物合成后，運(yùn)用PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙向測(cè)序拼接后，根據(jù)重復(fù)序列類型及順序進(jìn)行金葡菌的spa分型。
　　6.統(tǒng)計(jì)軟件SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同來源菌株之間、MRSA與MSSA之間的耐藥表型、耐藥基因與毒力基因攜帶率的差異用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果
　　1.藥敏結(jié)果顯示，275株金葡菌均對(duì)萬古霉素敏

5、感，其中醫(yī)院、生鮮肉和米面制品來源的菌株對(duì)所選的8種抗生素中的7種呈現(xiàn)不同程度耐藥，而肉制品和果蔬來源的對(duì)6種抗生素出現(xiàn)耐藥。與食品分離株相比，醫(yī)院來源的菌株對(duì)青霉素、紅霉素、克林霉素、環(huán)丙沙星和慶大霉素等5種藥物的耐藥率明顯較高，耐藥基因 acc(6')/aph(2'')，aph(3')-III，ermA，ermB和tetM的陽性率也比較高，ant(4',4'')的陽性率則比較低。食品與醫(yī)院來源的菌株中毒力基因陽性率最高的都是hla基

6、因，基因sea，seb，pvl和etb的陽性率在醫(yī)院來源的菌株中明顯較高，而hla和hlb則在食品來源的菌株中較高。
　　2.MRSA總檢出率是34.18％，其中醫(yī)院分離株MRSA檢出率為37.84%，食品分離株為29.92%，兩種來源菌株MRSA檢出率之間沒有明顯差異。在食品來源的菌株中，生鮮肉MRSA的檢出率為40.00%，肉制品是17.65%，果蔬是11.11%，米面制品則是29.73%。與MSSA菌株相比，MRSA對(duì)紅霉素

7、、克林霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素和四環(huán)素5種藥物的耐藥率明顯較高，耐藥基因ermA，msrA和tetM的陽性率在MRSA中也比較高，而毒力基因攜帶率在兩者中的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.94株MRSA菌株中有3種SCCmec型別，分別是SCCmecⅢ型(62.77%)、SCCmecⅣa型(15.96%)和SCCmecⅡ型(2.13%)，還有18株未分型。其中醫(yī)院和不同種類食品來源的MRSA菌株中都是SCCmecⅢ型比例最高。

8、>　　4.275株金葡菌中，agrⅠ型有167株(60.73%)、Ⅱ型45株(16.36%)、Ⅲ型41株(14.91%)、Ⅳ型11株(4.00%)，還有11株未分型。
　　5.醫(yī)院來源菌株中流行的spa型別是t030和t437，食品來源菌株中則是t002和t091。本研究中MRSA最常見的型別是SCCmecⅢ-t030-agrⅠ型和SCCmecⅣa-t437-agrⅠ型，MSSA菌株中最常見的型別則是t002-agrⅡ型和t189

9、-agrⅠ型。
　　結(jié)論
　　1.金黃色葡萄球菌耐藥現(xiàn)象普遍存在，食品中不同來源的菌株耐藥與毒力特點(diǎn)不同，醫(yī)院來源菌株與食品來源菌株相比，耐藥現(xiàn)象更嚴(yán)重，耐藥基因攜帶率、致病性都比較高。
　　2.MRSA與MSSA菌株相比，耐藥現(xiàn)象明顯，耐藥基因攜帶率高，但毒力基因攜帶率卻沒有差別。MRSA菌株中SCCmec分型的流行型別是SCCmecⅢ型，不同SCCmec型別耐藥譜不同，毒力基因攜帶率也有不同。
　　3.金葡菌